ELISA是什么检测方法？一文读懂酶联免疫吸附测定的原理、步骤与应用

ELISA，即酶联免疫吸附测定，是现代生命科学领域一项不可或缺的基石技术。无论是在疾病诊断、药物研发还是基础科研中，它都为研究人员提供了高灵敏度、高特异性的检测手段，能够对微量生物分子进行精确定量。那么，ELISA是什么检测方法？本文将为您详细解读。

什么是ELISA

酶联免疫吸附测定法ELISA（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay），是一种将抗原抗体的特异性免疫反应与酶的高效催化作用相结合的检测技术。其核心原理（以最常见的双抗体夹心法为例）可分为以下几个步骤：

1.包被：将特异性的捕获抗体固定（包被）在固相载体（如96孔酶标板）的表面，然后洗涤去除未结合的抗体。

2.加样：加入待测样本，如果样本中含有目标抗原，它就会与固相载体上的捕获抗体特异性结合。之后洗涤，去除样本中其他未结合的杂质。

3.加酶标抗体：加入酶标记的检测抗体。该抗体能与已经被捕获的抗原上的另一个位点结合，形成“捕获抗体-抗原-酶标检测抗体”的“三明治”复合物。然后再次洗涤，去除多余的、未结合的酶标抗体。

4.显色：加入酶的底物溶液。复合物上的酶会催化底物发生反应，产生颜色变化。

5.分析：颜色的深浅与样本中抗原的浓度成正比。通过酶标仪测定吸光度值（OD值），即可对目标抗原进行定性或定量分析。

ELISA类型

根据实验设计不同，ELISA可分为4种主要类型，以适应不同的检测需求。

1.直接ELISA(DirectELISA)：这是ELISA类型中比较简单的方法。将抗原固定后，直接加入被没标记的特异性抗体进行检测。优点是步骤少，速度快；缺点是每个抗体都要单独标记，成本高且灵活性差。

2.间接ELISA(IndirectELISA):相比直接ELISA，间接ELISA会多出一个步骤，先加入不带标记的一抗，再加入能识别一抗的酶标二抗。优点是灵敏度高，且一种标记二抗可用于多种不同一抗，通用性强，成本效益高。

3. 夹心ELISA(SandwichELISA)：这是一种将待检测抗原夹在两种抗体之间，像三明治一样。先将“捕获抗体”固定，加入样本后捕获抗原，再加入“检测抗体”进行识别。这种双抗体识别模式使其特异性和灵敏度都非常高，是定量检测抗原“金”标准。

4.竞争ELISA(CompetitiveELISA)：当待检测分子量很小或抗体配对很困难时使用。样本中的抗原会与我们加入的已知浓度抗原去“竞争”结合固定抗体。样本中的抗原越多，结合标记抗原就越少，颜色反应就越弱。因此，信号强度与浓度成反比例。因此，信号强度与样本浓度成反比。

ELISA步骤

虽然不同ELISA类型细节有所不同，但核心步骤万变不离其宗，通常在一个被称为“ELISA板”的96孔板中进行：

1.包被：将抗原或捕获抗体固定在ELISA微孔板的表面。

2.封闭：用牛血清白蛋白（BSA）等无关蛋白，封闭板上未结合的位点，防止后续抗体非特异性吸附。

3.加样与孵育：加入待测样本或抗体，在特定温度下孵育，让抗原抗体充分反应。

4.洗涤：吸取未结合的物质，减少背景干扰。

5.加入酶标抗体和底物：加入酶标抗体，孵育并洗涤，再加入酶底物显色。

6、终止反应与读板：加入终止液停止颜色反应，并使用酶标仪在特定波长下读取各孔的吸光度（OD）值，最终计算出结果。

Elisa应用

Elisa凭借其强大的检测能力，渗透在各个领域：

医学诊断：检测病毒抗体（如HIV、肝炎病毒）、激素水平（如HCG验孕）、肿瘤标志物等。

食品安全：检测食物中的过敏原、兽药残留、非法添加剂、致病菌毒素等。

生命科学研究：定量检测细胞因子、生长因子等各种蛋白质的表达水平。

环境监测：检测水体和土壤中的农药残留及工业污染物。

药物研发：用于筛选药物和评估药代动力学。

综合上述，ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种基于抗原抗体特异性结合，并通过酶催化显色反应进行定量或定性分析的强大免疫检测方法。它以其多样化的类型和标准化的操作流程，成为了现代科学研究和工业检测中不可或缺的工具。

如果您正在寻找高品质的ELISA试剂盒，或需要专业的ELISA检测技术服务来支持您的科研项目或产品开发，欢迎随时联系我们。我们的专家团队将为您提供最可靠的解决方案。