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小鼠骨髓中性粒细胞分离液试剂盒制备方法

发布时间:2022-06-28     发布作者:上海通蔚生物

骨髓单细胞悬液的制备方法

小动物骨髓的采集:

1. 处死动物,无菌提取股骨和胫骨,剪去两端软骨,露出红色的骨髓腔(注意尽可能少的剪走骨髓腔)。

2. 1ml的无菌注射器,吸取少量的含有10%标准胎牛血清的稀释液或者是含有血清的培养基,冲洗骨髓腔以获得骨髓。

3. 终制备成2×1081×109/ml 的单细胞悬液备用。

 

大动物骨髓的采集:

大动物骨髓的采集可采取活体穿刺方法:先将动物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮肤,然后估计好皮肤到骨髓的距离,把骨髓穿刺针的长度固定好。操作人员用左手把穿刺点周围的皮肤绷紧,右手将穿刺针在穿刺点垂直刺入,轻轻左右旋转将穿刺针钻入,当穿刺针进入骨髓腔时常有落空感。连接注射器缓慢抽吸骨髓组织,当注射器内抽到少许骨髓时即停止抽吸。用含10%标准胎牛血清的稀释液调整细胞浓度为2×1081×109/ml 的单细胞悬液备用。

 

常用的骨髓穿刺点:

股骨:穿刺部位在股骨内侧面,靠下端的凹面处;

胸骨:穿刺部位是胸骨体与胸骨柄连接处;

肋骨:穿刺部位是第57肋骨各点的中点;

胫骨:穿刺部位是股骨内侧、靠下端的凹面处。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺结束后要用胶布封贴穿刺孔,防止发生气胸。

 

注意事项:

A. 开封颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。。

B. 分离液使用时应始终保持室温(18~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。

C. 洗涤细胞,不可使用含CaMg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。

D. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。

E. 如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在收集血液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。

F. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。