ELISA试剂盒实验步骤详解：从样本制备到结果解读

  酶联免疫吸附测定 (ELISA) 是免疫学和临床实验室中广泛使用的诊断测试，用于检测样品中是否存在特定抗体、抗原或蛋白质。ELISA 测试有多种变体，包括直接、间接和夹心 ELISA。以下是间接 ELISA 程序的总体概述，该方法通常用于检测样品中是否存在抗体。详情elisa类型

  一、材料和试剂

  1. 微量滴定板（通常为96孔板）

  2. 抗原（您想要检测抗体的物质）

  3. 一抗（您要测试的抗体）

  4. 酶（通常是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶）缀合的二抗

  5. 底物溶液（酶存在时变色）

  二、ELISA步骤

  1. 涂板

  - 将抗原添加到微量滴定板的孔中并孵育以使抗原结合到塑料表面。然后洗掉任何未结合的抗原。

  2. 阻止

  - 在孔中添加封闭溶液以防止抗体的非特异性结合。

  3. 添加检测抗体

  - 将测试样品（含有一抗）添加到孔中并孵育。如果样品中存在一抗，它们将与包被的抗原结合。

  4. 洗涤

  - 清洗板以除去任何未结合的抗体。

  5. 二抗

  - 添加对一抗物种具有特异性的二抗（例如，针对人一抗添加抗人二抗）。二抗与酶缀合。

  6. 孵化

  - 孵育板，使二抗与任何与包被抗原结合的一抗结合。

  7. 洗涤

  - 清洗板以除去任何未结合的二抗。

  8. 添加底物：

  - 添加酶可以作用的底物溶液。该酶催化与底物的反应，导致颜色变化。颜色变化的强度与结合的二抗的量成正比，进而与样品中一抗的量成正比。

  9. 阅读结果

  - 测量板中每个孔的吸光度或光密度。酶标仪用于量化颜色变化，这与样品中一抗的浓度直接相关。

  10. 数据分析

  - 将测试样品的吸光度值与标准曲线或对照样品进行比较，以确定测试样品中一抗的浓度。

  值得注意的是，ELISA 程序可能会根据所测试的特定抗原抗体系统和所使用的 ELISA 类型（例如直接、间接、夹心）而有所不同。ELISA 测试还可以适应各种应用，包括检测抗原或蛋白质，而不仅仅是抗体。此外，所使用的试剂和条件可能有所不同，因此必须遵循所使用的特定 ELISA 试剂盒或实验室方案提供的说明。