ELISA是一种快速、灵敏、准确、可靠的定量分析方法。样品制备是ELISA实验成功的关键。在开始采集ELISA样品时，我们可能会遇到一些问题。用于ELISA的常见样品包括血液（血清、血浆）、组织匀浆、细胞裂解液和细胞培养上清液等。许多因素都会影响ELISA实验的结果，例如采样时间、处理、保存等。现在为大家介绍样品处理方法，以供参考。
血样本
血清和血浆是血液处理中常见的两种样本类型。它们的主要区别在于血清在凝固后分离而得，缺乏纤维蛋白原，而血浆则在加入抗凝剂后分离得到。但由于血浆中含有纤维蛋白原，当纤维蛋白原对检测目标有影响时，建议使用血清。两者均适用于大多数ELISA实验。
血清处理：将血样品放入血清分离管中，让其在室温下凝固两小时或在4°C下过夜。随后，以约1,000×g的速度离心20分钟，将血清分离出来。建议立即使用新鲜制备的血清，或将其分装并存储在-20°C或-80°C下以备后用，但要避免反复冻融。
血浆处理：使用EDTA或肝素作为抗凝剂来收集血浆。收集后的血样品应在30分钟内在2-8°C下以1,000×g的速度离心15分钟，将血浆分离出来。同样，建议立即使用或分装后存储在-20°C或-80°C下，但要避免反复冷冻/解冻循环。
组织匀浆
组织冲洗和称重：首先，在冰冷的PBS中彻底冲洗组织样本，以去除多余的血液，并确保维持组织的完整性。在进行均质化之前，请务必称重组织样本，以确保后续步骤中添加适量的裂解液。
组织切碎和加入裂解液：将组织样本切碎并置于新鲜的裂解液中。根据目标蛋白的亚细胞位置，选择适当的裂解液。建议在每单位组织重量中添加特定比例的裂解缓冲液，以确保最佳的裂解效果。
超声处理：使用超声波细胞破碎仪对悬浮液进行超声处理，直到溶液变得清澈透明。确保超声处理的时间和功率是一致的，以获得均匀的悬浮液。
离心和保存：将匀浆在适当的离心速度下离心，以去除细胞碎片和残留的细胞核。收集上清液，可立即进行测定，或分装后存储在≤-20℃以备后用。请注意，避免反复冷冻/解冻循环，以保持样品的稳定性和质量。
细胞裂解物
洗涤和分离细胞：贴壁细胞首先使用冷PBS轻轻洗涤，然后使用胰蛋白酶进行分离。对于悬浮细胞，可以直接进行离心收集。
重复洗涤：对细胞进行三次冷PBS清洗，以确保去除残留的培养基或其他污染物。
裂解：将细胞悬浮于新鲜的裂解缓冲液中，浓度为107个细胞/mL。如果需要，可以对细胞进行超声波处理，直到溶液变得清澈透明。
离心去除细胞碎片：在2-8℃条件下，以1,500×g的速度离心10分钟，以去除细胞碎片和其他杂质。
检测或分装：收集上清液并立即进行测定，或将样品分装存储在≤-20℃。对于细胞培养上清液，以1,000×g的速度离心样品20分钟，收集上清液并立即测定，或将样品分装在-20℃或-80℃下备用。避免反复冻融，以确保样品的稳定性和质量。
粪便
样本采集：取8份100mg（约80-120mg）的粪便样本。
样本处理：将每份粪便样本加入5mlPBS中，并在振荡器中振荡40秒，以确保样品的均匀混合。
均质化：将混合后的样品在室温下均质化25-30分钟，以确保充分裂解和释放目标分子。
离心：将均质化后的样品以1mL的量转移到新的离心管中，并以10,000×g的速度离心20分钟，以沉淀固体颗粒和杂质。
收集上清液：立即收集离心后的上清液进行测定，或将其等分并储存在≤-20℃或-80℃，以备后续使用。务必避免样品反复冷冻/解冻循环，以确保样品质量和稳定性。
尿液
样品采集：将当天的第一次尿液（中流）或者24小时尿液以无菌方式直接收集到无菌容器中。
离心：将尿液样品以1,000×g的速度离心15分钟，以沉淀固体颗粒和杂质。
收集上清液：立即收集离心后的上清液进行测定，或将其等分并储存在-20℃或-80℃，以备后续使用。务必避免样品反复冷冻/解冻循环，以确保样品质量和稳定性。
脑脊液
离心：将脑脊液样本以1,000×g的速度离心15分钟，以沉淀固体颗粒和杂质。
收集上清液：立即收集离心后的上清液进行检测，或将其等分并储存在-20℃或-80℃，以备后续使用。务必避免样品反复冷冻/解冻循环，以确保样品质量和稳定性。
样品处理的目的 是为了收集目标分子，这是实验成功的前提。由于蛋白质一般都容易 变性和 降解，因此处理过程应尽量温和。样品的保存也很重要，尤其要注意不要反复冻融，样品可分装保存，4℃保存时间不超过一周，-20℃保存时间不超过1个月，-80 ℃保存时间不超过2个月。测定前，将样品恢复至室温，严禁加热样品。
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