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【通蔚生物】: 石蜡切片免疫组化原理

发布时间:2021-11-10     发布作者:上海通蔚生物

石蜡切片免疫组化原理将样本固定后包埋到石蜡内,将包埋后的组织切片经脱蜡处理并微波修复抗原,加3%过氧化氢阻断组织内源性过氧化物酶,一抗特异性结合目的蛋白,4 ℃孵育过夜后,37 ℃复温30 min,PBS洗涤干净后加入二抗孵育35 min(二抗结合特异一抗),洗净后加显色剂,二抗的标记与显色剂反应显色。显色完成后加苏木素复染细胞核,1%的盐酸酒精分化后,水洗返蓝再脱水封片,晾干后即可在镜下观察组织阳性表达分布。


石蜡切片免疫组化操作步骤

1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时) 。
2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶:3%H2 O2 ,室温 10 分钟(避光)
3.蒸馏水洗:5 分钟,2 次(置于摇床) 。
4.抗原修复:根据待检测的抗原,选择适当的方法。
5.PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。
6.正常血清封闭:从染片缸中取出切片,擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 (保持组织呈湿润状态,)滴加正常山羊或兔血清 (与第二抗 体 同源动物血清)处理,37℃,15 分钟。
7.苏木素复染,室温,30 秒,自来水冲洗。
8.梯度酒精脱水:80%,2 分钟 95%,2 分钟 100%,2 次,5 分钟。
9.二甲苯透明:I ,II (二甲苯)各 5 分钟
10.封片:加拿大树胶(或中性树胶)封片