【通蔚生物】：蛋白ELISA检测试剂盒操作流程方法如下

1. ELISA检测试剂盒待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 

2. 酶标板置4℃，包被过夜。

3. 洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后，即甩去，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

4. 阴性对照孔每孔加入pbs 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。 

5. 酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

6. 洗板，同4。 

7. 每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 

8. 酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

9. 洗板，同4。 

10. 每孔加tmb显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 

11. 每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。 

12. 分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，终测得的od值为两者之差w1-w2，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

13. ELISA检测试剂盒数据处理：在得出标本s和阴性对照n的 od值后，计算s/n值。s/n***2.1为阳性判定标准。