揭示ELISA实验原理与类型，让检测更精准

  ELISA是生物实验不可缺的一部分，在实验过程中对ELISA原理及类型的了解有助于更好的实现实验效果。今天由上海通蔚给大家介绍一下ELISA原理和类型。
  
  内容：
  
  什么是ELISA？
  
  ELISA基本原理？
  
  ELISA优点和缺点？
  
  ELISA的类型？
  

  什么是ELISA？

  

  ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种检测生物样品中抗原是否存在的技术。与其他类型的免疫测定一样，ELISA 依赖于抗体，利用高度特异性的抗体-抗原相互作用来检测目标抗原。

上海通蔚elisa试剂盒

  

  ELISA 基本原理

  

  在 ELISA 测定中，抗原被固定到固体表面。这可以直接完成，也可以通过使用固定在表面上的捕获抗体本身来完成。然后将抗原与检测抗体复合，该检测抗体与适合检测的分子（例如酶或荧光团）缀合。

  
  图 2. ELISA 测定的基本设置。多孔板上的捕获抗体将固定的抗原。该抗原将被与生物素和链霉亲和素-HRP 缀合的检测抗体识别并结合。
  
  ELISA 测定通常在多孔板（96 或 384 孔）中进行，多孔板提供固定抗原的固体表面。分析物的固定有助于将抗原与样品中的其余成分分离。这一特性使得 ELISA 成为同时对多个样品进行的最简单的检测方法之一。
  

  ELISA优点和缺点？

  
  ELISA 的优点和缺点
  
  优点
  
  • 高灵敏度和特异性：由于使用了抗体，ELISA 通常能够以非常特异的方式检测皮克水平的抗原。
  
  • 高通量：商业 ELISA 试剂盒通常以 96 孔板形式提供。但该测定可以轻松适应 384 孔板。
  
  • 易于执行：协议易于遵循，几乎不需要动手操作时间。
  
  • 定量：可以测定样品中抗原的浓度。
  
  • 可以测试各种样本类型：血清、血浆、细胞和组织提取物、尿液和唾液等。
  
  缺点
  
  • 临时读数：检测基于酶/底物反应，因此必须在短时间内获得读数。
  
  • 有限的抗原信息：信息仅限于样品中抗原的数量或存在。
  

  ELISA 的类型

  
  ELISA 主要有四种类型：直接 ELISA、间接 ELISA、夹心 ELISA 和竞争 ELISA。每个都有独特的优点、缺点和适用性。
  

  直接ELISA

  
  在直接 ELISA 中，抗原被固定到多孔板的表面，并用对该抗原具有特异性的抗体进行检测。该抗体直接与 HRP 或其他检测分子缀合。
  

  间接ELISA

  
  间接 ELISA是一种采用两步过程进行检测的技术，其中对抗原具有特异性的一抗与靶标结合，而针对一抗宿主物种的标记二抗与一抗结合进行检测。对于直接 ELISA 测定，抗原固定在多孔板的表面。
  
  该方法还可用于通过用血清代替一抗来检测血清样品中的特异性抗体。
  
  夹心ELISA
  
  夹心 ELISA（或夹心免疫测定）是最常用的形式。这种形式需要两种针对抗原不同表位的特异性抗体。这两种抗体通常称为匹配抗体对。其中一种抗体包被在多孔板的表面并用作捕获抗体以促进抗原的固定。另一种抗体被缀合并促进抗原的检测。
  

  竞争性ELISA

  
  竞争性 ELISA 测定也称为抑制 ELISA 或竞争性免疫测定，通过检测信号干扰来测量抗原浓度。之前的每种赛制都可以适应竞争赛制。
  
  样品抗原与参考抗原竞争结合特定量的标记抗体。将参考抗原预涂在多孔板上，将样品与标记抗体预孵育并添加到孔中。根据样品中抗原的量，或多或少的游离抗体将可用于结合参考抗原。这意味着样品中的抗原越多，检测到的参考抗原越少，信号越弱。
  

  一些竞争性 ELISA 试剂盒使用标记抗原而不是标记抗体。标记抗原和样品抗原（未标记）竞争与一抗的结合。样品中抗原的量越低，由于孔中标记的抗原越多，信号越强。

  我应该使用哪种类型的 ELISA？

	优点	缺点
直接elisa	方案短：节省时间和试剂。 与二抗无交叉反应。	潜在的高背景：样品中的所有蛋白质都与表面结合。 无信号放大。 灵活性低：一抗必须偶联。
间接elisa	信号放大：多个二抗将与一抗结合。 高灵活性：同一个二抗可用于多种一抗。	与直接 ELISA 相比，实验方案较长。 二抗的潜在交叉反应性。
夹心elisa	高特异性：涉及两种抗体检测同一抗原上的不同表位。 适用于复杂样品。 灵活性和灵敏度高：直接法和间接法均可使用。	要求严格的设计：找到针对同一目标的两种抗体， 它们能够识别不同的表位并且能够很好地协同工作，有时可能具有挑战性。
竞争elisa	取决于所选的基础 ELISA。 适用于小抗原。	取决于所选的基础 ELISA