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夹心 ELISA法优点和步骤详解

发布时间:2024-01-15     发布作者:上海通蔚生物

  ELISA 主要有四种类型:直接 ELISA、间接 ELISA、夹心 ELISA 和竞争 ELISA。每个都有独特的优点、缺点和适用性。今天,上海通蔚生物带大家认识夹心ELISA试剂盒及步骤。详细了解ELISA类型可以参考《ELISA 的类型》。

  夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)是有效的实验室程序,有助于检测样品中目标抗原的存在并测量其浓度。该测试用于计算两层抗体(即捕获抗体和检测抗体)之间的抗原。在夹心 ELISA 中,两种抗体在使用前必须配对并进行测试。此外,在进行夹心 ELISA 时,捕获抗体和检测抗体不得干扰彼此的结合能力。夹心 ELISA 的主要优点之一是能够特异性测量不纯样品中的抗原。三明治检测的极其稳健的性质使其成为医疗目的的绝佳诊断工具,特别是用于识别潜在的食物过敏原或测试某些药物。

  什么是夹心ELISA


  如前所述,该测试可用于识别和量化未知样品中的抗原浓度。由于该测试的过程使用至少两种抗体,因此待测量的抗原还必须具有至少两个能够与抗体结合的非重叠表位(抗原决定簇)。在夹心 ELISA 中,单克隆和多克隆抗体用作检测和捕获抗体。单克隆抗体用作检测抗体,因为它们有助于更准确的检测和定量,而;多克隆抗体被用作捕获抗体,因为它们有助于尽可能多地结合抗原。详细了解单克隆和多克隆可以参考《蛋白质免疫测定:认识多克隆抗体和单克隆抗体


elisa


  夹心elisa优点


  夹心ELISA检测有哪些优点?

  夹心 ELISA 测试涉及使用两种抗体。因此,在夹心 ELISA 的帮助下,可以更特异性地捕获和检测抗原。

  夹心 ELISA 测试更适合复杂的样品,因为抗原在测量前不需要纯化。

  夹心 ELISA 比直接和间接 ELISA 测试的灵敏度高 2 至 5 倍。它还可以快速、准确地得出未知样品中的抗原结果。

  在此可以使用直接和间接检测方法,因此夹心ELISA具有良好的灵敏度和灵活性。

  夹心 ELISA 步骤


  第一步是用特定数量的捕获抗体准备表面(例如多孔板)。

  接下来,封闭表面上未结合的蛋白质结合面,以减少背景和非特异性结合。

  之后,将含有目标抗原的样品添加到板中。应允许靶抗原孵育,以便它可以与固定的捕获抗体结合。

   洗涤,以除去未结合的抗原。

  接着,添加检测抗体,同时确保它与捕获抗体结合到抗原上的不同位置。  

  再次,孵育后,清洗板,以除去连接的未结合的抗体-酶。  

  在此步骤中,添加被酶改变颜色、电化学信号或荧光的底物。现在测量多板孔上的荧光或电化学信号以确定抗原的存在和数量。