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ELISA试剂盒实验前的准备事项

发布时间:2024-01-08     发布作者:上海通蔚生物

  Elisa试剂盒正确的实验步骤是实验结果准确必备条件,了解elisa试剂盒实验注意事项有助于实验成功进行。接下来上海通蔚带大家来了解elisa试剂盒实验步骤及注意事项。
  elisa试剂盒步骤

  Elisa试剂盒实验步骤

  
  第一步叫做包被,把抗原和共享载体结合起来。
  
  第二步叫洗涤,洗涤相对elisa实验来说是相对比较重要的第一步,每一次操作中间都要洗涤。洗涤液一般是缓冲液,里面加上土温,土温是去污剂,可以把没有结合的物质洗掉。
  
  第三步是封闭,封闭就是固相材体就相当于一个非常大的空间,抗原只有结合其中非常少的一部分,其他地方还有很多待结合的位点,需要用到杂蛋白把这些位点全部覆盖起来,才能让一抗和二抗与空白位点结合。
  
  封闭之后,还要把多余的蛋白洗涤之后,就可以进行加样,把待检抗体加进体系中,让待检抗体和包被在固相载体上的抗原进行特异性结合。把多余的待检抗体洗涤之后,就会得到抗原和抗体结合的复合物。
  
  之后加入酶标二抗,这部分抗体属于一抗的FC端结合的抗体,同时还带着酶标记,所以它只是起到2种作用。一种作用是把酶和待检物质中抗体含量结合起来一种作用,类似一种桥梁。
  
  把多余的二抗洗涤之后,就会形成一种二抗、一抗和待检测抗原包含酶的复合物。
  
  第四步加入显色液,可以让它产生颜色反应。终止之后一般加入氢氧根或者酸根离子,就是盐酸或者氢氧化钠去终止整个反应,上述就是整个ELISA过程。
  
  完成ELISA试剂盒实验步骤之后,最后一步拿到酶标语上进行读数,得到最终把它量化的仪器叫做酶标语,就是专门去作为读数用的。一般来说现在用盐酸中指的波长应该是450纳米,去对它进行读数,最后对结果有一个量化的体现。
  

  elisa试剂盒注意事项


       在ELISA试剂盒实验过程还有一些注意事项:
  
  第一点就是包被液选择。包被液就是把抗原包被在固相载体上的稀释液S包。一般分为2种,一种是PBS,一种是CPS,其中这两个比较常用的是PSB.
  
  第二点就是包被温度的选择。一般来说包被温度都是4度条件下过夜或者37度保温2小时。一般建议4度条件下包被,因为蛋白容易在37度降解。
  
  第三点就是包被浓度选择。包被浓度根据实验效果、实验条件还有包被物的性质去改变的。一般来说蛋白质包被的浓度推荐是1-5ug/ml。
  
  第四点就是封闭液的选择。一般使用1-5%的脱脂牛奶或者血清蛋白。大家可以根据抗原的条件来进行选择,其实大多数情况下脱脂牛奶就够了。
  
  上述为大家解释了ELISA试剂盒实验步骤及注意事项,大家根据自己实验目标进行参考。如果您想了解elisa试剂盒,上海通蔚有15年以上的ELISA试剂盒生产经验,可提供4000多种 ELISA试剂盒,主要采用夹心法和竞争法,覆盖3000个靶标,涉及小鼠、大鼠、牛、兔、猪等20多个种类。