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ELISAKIT的基本组成和操作流程

发布时间:2023-11-10     发布作者:上海通蔚生物

   elisa试剂盒对于搞科研的人来说还是比较神秘,elisa试剂盒来的时候就是一个盒子,这个盒子到底有什么神奇的地方呢?又有哪些部分组成?具体操作流程有哪些?下面跟随上海生蔚一起来了解一下吧!

  ELISAKIT的基本组成


elisa试剂盒组成

elisa试剂盒


  酶标板:用于抗原-抗体复合物的孵育和洗涤。

  酶标抗体:与待测样本中的抗原特异性结合的抗体,通常采用辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)标记。

  酶标二抗:与酶标抗体结合的特异性抗体,用于增强信号。

  底物:用于显色反应的化学物质,如TMB(四甲基联苯胺)或ABTS(二氨基联苯胺)。

  终止液:用于停止显色反应的液体,通常是硫酸。

  洗涤液:用于清洗酶标板上的未结合物质。

  说明书:包含操作指南和注意事项。

  ELISAKIT操作流程


eliasa试剂盒操作流程

elisa试剂盒操作步骤


  准备工作:将所需试剂从冰箱中取出,恢复至室温。准备一块干净的酶标板,根据实验设计设置合适的孔数和加样位置。

  加样:根据说明书要求,将待测样本和标准品加入酶标板上的相应孔中。通常采用自动加样器或手工滴加。

  孵育:将酶标板封闭后,在恒温条件下孵育一定时间,使抗原-抗体复合物形成。

  洗涤:用洗涤液清洗酶标板,去除未结合的物质。

  加酶标抗体:将酶标抗体加入酶标板上的相应孔中,封闭后再次孵育。

  洗涤:用洗涤液清洗酶标板,去除未结合的酶标抗体。

  加底物:将底物加入酶标板上的相应孔中,孵育一定时间后显色。

  终止反应:用终止液停止显色反应。

  检测:用酶标仪读取各孔的光密度值,记录数据并进行分析。

  数据处理与分析:根据所得数据计算待测样本的浓度或活性。可以参考说明书提供的标准曲线或计算公式进行计算。

  结果报告:根据实验目的和要求,撰写实验报告并提交结果。

 上海通蔚提醒,在使用ELISA试剂盒时,需要注意以下操作事项:

  仔细阅读试剂盒说明书,了解试剂盒的原理、操作步骤和注意事项。

  实验室环境应保持清洁,避免污染试剂盒。

  所有试剂在操作前需要充分混匀,避免沉淀或分层。

  加样时,应按照说明书要求,使用自动加样器或手工滴加。

  孵育时间应按照说明书要求进行,以确保抗原-抗体复合物充分形成。

  洗涤要充分,每孔洗液加样过少或残留都会导致显色过快,同时背景较高。

  手洗板时所用枪头悬空加入洗液,避免洗液污染。

  剩余酶标板条应及时放入干燥袋,避免受潮。

  试剂盒保存条件应严格按照说明书要求进行,过高的温度或过低的冷藏温度都会导致试剂盒敏感性下降。

上述是上海通蔚介绍的ELISA试剂盒的基本组成和操作流程,在操作试剂盒过程务必要注意事项,避免导致实验过程导致读数出现误差。