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蛋白质免疫测定:认识多克隆抗体和单克隆抗体

发布时间:2024-01-05     发布作者:上海通蔚生物

  为您的蛋白质免疫测定找到合适的抗体可能具有挑战性。一种抗体在某项测定中效果良好,但在另一种测定中可能无法发挥作用。因此,本文将为您提供有关两种广泛使用的抗体(单克隆抗体和多克隆抗体)之间差异的有用信息。此外,在您选择抗体之前,我们还提供了一些注意事项。


  在本文中中你将了解到:


1.   什么是抗体?

2.   什么是单克隆抗体和多克隆抗体?

3.   单克隆抗体和多克隆抗体有什么区别?

4.   单克隆抗体和多克隆抗体是如何产生的?

5.   单克隆抗体和多克隆抗体的用途是什么?

6.   如何选择抗体



  什么是抗体?


  抗体是血液中免疫系统的蛋白质成分,可识别细菌和病毒等入侵者。抗原是诱导免疫反应激活(包括抗体产生)的外来物质。而表位是抗体结合的抗原的一部分。


  什么是抗体


  在蛋白质研究中,有两种流行的抗体类型:单克隆抗体和多克隆抗体


  什么是单克隆抗体和多克隆抗体?


  单克隆抗体是 针对抗原的单一表位的相同抗体群。


  单克隆抗体和


  多克隆抗体是 针对同一抗原内许多表位的异质抗体 群体。


  多克隆抗体


  单克隆抗体和多克隆抗体有什么区别?


  这两类抗体的主要区别



  •   单克隆抗体



  单克隆抗体中的抗体群体是同质的。


  它们识别抗原的单个表位。


  单克隆抗体的生产涉及动物和杂交瘤细胞(源自脾细胞和骨髓瘤细胞融合的细胞)。



  •   多克隆抗体



  多克隆抗体群体是异质的。


  它们识别抗原中的多个表位。


  多克隆抗体的生产只需要动物。


  单克隆抗体和多克隆抗体是如何产生的?


  单克隆抗体的生产首先向动物注射抗原。几周后,收集脾细胞并与骨髓瘤细胞融合。脾细胞产生抗体,但它们无法在培养物中生长。相反,在培养物中生长的骨髓瘤细胞无法产生抗体。两种细胞融合后,选择并培养杂交细胞,也称为杂交瘤细胞,以产生相同的单克隆抗体。


单克隆抗体产生


  多克隆抗体是通过将特定抗原注射到动物体内来产生的。几天后,动物接受加强注射抗原,以产生大量针对该抗原的抗体。然后,收集或纯化含有多克隆抗体的血清。


  多克隆抗体产生


  单克隆抗体和多克隆抗体各有哪些优缺点?



  •   单克隆抗体



  优点:


  对单一表位具有高特异性


  交叉反应风险低


  批次间差异较小


  缺点


  抗原容易发生轻微变化


  昂贵的


  更多的时间来生产



  •   多克隆抗体



  优点:


  抗原不易发生轻微变化


  对目标抗原具有高灵敏度和亲和力


  更便宜


  快速生产


  缺点:


  交叉反应风险高


  容易出现批次差异


  单克隆抗体和多克隆抗体的用途是什么?


  单克隆抗体


  单克隆抗体具有高特异性,因此它们可用于一些需要对单个表位具有特异性的抗体的研究应用。因此,生产治疗性抗体是药物开发的一种有吸引力的方法


  单克隆抗体还可用于定量特定靶蛋白的水平;例如,在 ELISA 或放射免疫测定中。


克隆抗体应用


RELA单克隆抗体


  它们还可用于蛋白质印迹 (WB)、免疫组织化学 (IHC) 和免疫荧光测定 (IF)。然而,根据表位的不同,单克隆抗体也可能对这些方法无效。由化学物质、pH 值或温度引起的蛋白质结构的变化会影响单克隆抗体的效率。


  针对天然蛋白质产生的单克隆抗体可以识别构象表位或含有不连续氨基酸残基的表位。因此,这些单克隆抗体可能无法识别靶蛋白变性状态上的表位。


  不连续氨基酸残基、构象表位、连续残基、线性表位


  不连续残基是一级序列中相距较远,但折叠结构中彼此接近的氨基酸。在这种情况下,选择可以识别连续残基或线性表位的单克隆抗体。否则,请考虑使用多克隆抗体。


  多克隆抗体


  多克隆抗体可用于许多一般研究应用和诊断测定,因为它们对目标抗原具有高亲和力并且对目标蛋白的微小变化具有耐受性,


  细胞色素c多克隆抗体


  多克隆抗体的应用包括以下方法中的一种或多种:蛋白质印迹、ELISA、免疫组织化学、免疫荧光测定和免疫沉淀 (IP)


  如果针对变性抗原产生多克隆抗体,则多克隆抗体可识别变性状态下靶蛋白的表位。测定过程中的处理,例如免疫组织化学过程中的福尔马林固定,可以改变组织分子以形成交联并掩盖表位。因此,在蛋白质印迹中表现良好的多克隆抗体可能无法在免疫组织化学中识别靶蛋白。


  多克隆抗体可能会导致交叉反应和高背景噪音。因此,在进行检测时,必须包含良好的对照,例如蛋白质印迹中的纯化重组蛋白作为参考。


  在选择之前,将抗体与检测方法相匹配并研究其详细信息,包括抗体的特异性。


  验证抗体特异性的一种方法是使用基因敲除 (KO) 验证。使用此方法验证的特定抗体通常不会在敲除细胞系的蛋白质印迹上产生信号,但会在野生型细胞系的预期大小上产生良好的信号。


  如何选择抗体


  检查有关抗体类型和验证的信息。


  根据有关应用的信息将抗体与您的蛋白质检测相匹配。


  当检测需要高特异性时,选择单克隆抗体。


  选择多克隆抗体进行需要高灵敏度和亲和力的检测。


  考虑抗体的成本以及您的检测所需的数量。例如,使用昂贵的抗体并运行特定的测定(例如 ELISA)可能会变得过于昂贵。


  通过查找有关检测中需要多少稀释度的信息来检查抗体的灵敏度。


  确保叠氮化钠或 BSA 等添加剂与您在测定中使用的试剂兼容。


  在将抗体用于重要样品之前,先用重组靶蛋白测试抗体。


  在蛋白质检测中包括阳性和阴性对照。