【通蔚生物】：ELISA试剂盒实验操作要点和处理方法

优质的ELISA试剂盒是保证检验质量的基础。从4℃冰箱取出的试剂必须放置室温20～30 min 后再启用，否则水化层的形成可能影响试剂的原始浓度及试剂中溶质分子的均匀分布。未用完的试剂和质控品应密封并及时放回冰箱保存。根据蛋白质在冷冻过程中出现蛋白分子分布改变的特点，试剂正式启用前应充分混匀。所用蒸馏水、去离子水和自行配制的缓冲液等，都必须调整其pH值和离子强度等。不同批次的试剂在制作过程中很难保证质量一致，因此必须选择和订购长批号的试剂，并保证保存条件，严格执行这一标准可以避免试剂批号改变而重建质控体系及重新评估试剂的复杂过程，并且能够保证结果的稳定性。

患者标本中有可能含有干扰试验的免疫物质，导致假阳性或假阴性的结果，干扰因素一般可分为两类，即内源性和外源性干扰因素。内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等，避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂；外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长及标本凝固等。要注意避免标本出现严重溶血，标本中血红蛋白中含有血红素基因，其具有类过氧化物的活性，因此，在以辣根过氧化物酶(HRP)为标记的ELISA试剂盒测定试验中，容易在温育过程中吸附于固相，从而与加入的底物反应显色。

标本在低温下保存时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA试剂盒测定中会导致本底加深，甚至出现假阳性结果。通常血清标本可在2～8℃保存1 周，冷冻保存时间会更长。血清标本应充分离心，否则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。冷冻保存标本避免反复冻融，标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，使抗体效价下降从而引起假阴性结果。标本的采集及分离要注意尽量避免细菌的污染。此外，标本在冻存时会因蛋白质局部浓缩分布不均，因此重新溶解的标本必须混匀，但不要剧烈振荡和反复颠倒。