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【通蔚生物】:活性蛋白提取试剂盒的应用

发布时间:2022-06-23     发布作者:上海通蔚生物

【通蔚生物】:活性蛋白提取试剂盒的应用

活性蛋白提取试剂盒用于从动物组织中提取有活性的总蛋白,该试剂由一种温和的非离子型去污试剂、缓冲试剂和氯化钠等组成。采用匀浆或超声破碎时,该试剂高效提取的蛋白质可以尽可能地保持活性,可以用于1D和2D电泳、免疫共沉淀、Pull down、EMSA、报告基因分析(Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等)、蛋白质激酶分析(PKA、PKC、Tyrosine Kinase等)、酶免分析(Western Blot、ELISA、RIA)、蛋白质纯化等实验,含有的去污试剂可通过透析去除。

活性蛋白提取试剂盒由抽提试剂、蛋白酶抑制剂混合物、DTT和PMSF组成。

特点:
整个实验过程只需要20 min左右;
可以处理20×100 mg的动物组织样品;
提取的蛋白质可以透析去除离子和去污试剂,或将缓冲液替换为所需要的合适缓冲液;
提取的活性蛋白质保持非变性状态,可以直接用于1D和2D电泳、Pull Down、EMSA、免疫共沉淀、蛋白纯化、酶活分析等实验;
可以维持报告基因酶(Luciferase、β-galactosidase、Chloramphenicol Acetyltransferase等)、蛋白质激酶(PKA、PKC、Tyrosine Kinase等)的活性。

操作步骤
1.将100 mg组织剪切成小块,尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织,加入适量的预冷的1X PBS于4°C,700 g(3000rpm)离心3 min,弃掉上清,重复洗涤两次。

2.向以上洗涤后的组织中加入1 mL预冷的抽提试剂(使用前向每1 mL抽提试剂中加入1μl DTT,10μl PMSF,1μl蛋白酶抑制剂),置玻璃匀浆器冰上均质30~50次至组织完全成匀质状液体无明显组织小块。

3.最大速度涡旋振荡10 sec,冰上放置20 min,期间取出振荡3~5次,再于4°C,12830g(12000 rpm)离
心10 min以沉淀组织或细胞碎片,转移上清为组织活性总蛋白部分,分装并保存于-80°C,用于下游实验。