ELISA技术中抗原与抗体的反应
ELISA是一种免疫测定。免疫测定(immunoassay, IA) 是应用免疫学技术测定标本的方法。在检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。
ELISA技术中抗原与抗体的反应
抗原抗体反应
可逆性抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为Ag+Ab-+Ag*Ab抗体的亲和力(亲和)是抗原抗体间的固有结合力，可以平衡常数<表示：K=[Ag-Ab]/[Ag][Ab]。AG-Ab的解离程度与K值有关.高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离.解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性，因此可用亲和层析法来提纯抗原或抗体.在抗血清中，特异性的IgG抗体仅占总IgG中的极小部分。用亲和层析法提取的特异性抗体，称为亲和层折纯抗体，应用于免疫测定中可得到更好的效果.
免疫测定在检验中的应用
1、体液中的各种蛋白质，包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等。
2、激素，包括小分子量的甾体激素等。
3、抗生素和药物。
4、病原体抗原，HBsAg、HBeAg等。
5、另外，也可利用纯化的抗原检测标本中的抗体，例如抗-HBs等。
ELISA技术中抗原与抗体的反应如上所述，免疫测定是一种很敏感的测定方法，抗原抗体反应后直接测定形成的沉淀或浊度，敏感度可达5~10μg/ml,但在检验中，某些待测物在标本中的含量远低于这一水平，因此要寻找增加敏感度的方法。标记的免疫测定是将检测试剂中的抗原或抗体用可微量测定的物质加以标记，通过测定标记物来提高敏感度。在放射免疫测定和酶免疫测定中，标记物分别为放射性核素和酶，最后用测定放射性和酶活力来计算待检物的量，敏感度可比直接测定沉淀物提高数百至数千倍。在标记免疫测定中，一-般加入过量的标记试剂以保证与待测物彻底反应。以标记抗体(Ab※)检测抗原(Ag)为例，反应式如下: Ag+ Ab※→AgAb※+ Ab※。在反应产物中有与Ag结合的Ab※和游离和Ab※，如不将两者分离而测定标记物，测得的结果将为两者之和。因此，游离标记物与结合标记物的分离是标记免疫测定中的重要步骤。可采用多种手段，固相载体是其中之一。如将抗原或抗上，而游离的标记物留于溶液中。这样可以通过洗涤将游离的Ab※除去，结合标记物的测上，而游离的标记物留于溶液中。这样可以通过洗涤将游离的定可在固相上进行。Ab※除去，结合标记物的测
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