实验结果不稳定？教你如何挑选优质 ELISA 试剂盒

  酶联免疫吸附测定(ELISA)是酶免疫测定技术中应用最广的技术。用于检测抗体或抗原的存在与浓度，用于检测抗体或抗原的存在与浓度。如今，市面上供应各样的ELISA试剂盒，种类多样，适用于越来越多的目标，每种试剂盒都声称具有特异性、灵敏度和可靠性。在这里，上海通蔚生物将带您了解选择ELISA试剂盒考虑关键因素，确保您的选择符合您的目标和要求。

  确定自己ELISA试剂盒类型

  ELISA试剂盒分为4种类型，分别是直接elisa、间接elisa、夹心elisa和竞争elisa。

  1、直接ELISA、与报告酶（例如HRP或AP）缀合一抗特异性结合微孔板孔中包被的抗原。

  2、间接ELISA遵循类似的原理，但使用未标记的一抗与偶联的二抗配对。

  3、夹心ELISA用一抗包被孔，一抗又结合样品抗原。将添加一组新的抗体，在抗原上形成三明治（夹心）。

  4、在竞争性ELISA中，未标记的一抗首先与样品抗原复合。将它们添加到涂有抗原的孔中。洗涤后，只有游离的、未结合的抗体才会与包被的抗原结合。添加偶联的二抗和底物后，会产生与样品中抗原量成反比的信号；样品中抗原的量越大，信号越弱。该ELISA的另一种变体使用一抗来包被孔。然后标记的抗原将与样品抗原竞争结合。所得的检测信号仍然成反比。

  具体选择哪种类型取决于自己的实验目标和抗原的潜在丰度，例如复杂样品中的分析物丰度较低，那么夹心ELISA可能是最佳选择。这将允许多次洗涤以降低背景噪音，并且仍然允许放大二抗的信号以确保整体灵敏度。如果您对检测特定的免疫球蛋白感兴趣，那么间接ELISA是合适的选择。如果测定速度和简单性是最重要的因素，那么直接ELISA可能是您的最佳选择。确定检测的总体目标将帮助您确定哪种ELISA类型最适合您的需求。详情可以参考《elisa试剂盒有哪几种类型？elisa四类型图解》

  如何选择正确的ELISA试剂盒

  靶抗原特异性

  靶抗原特异性直接关系到实验结果的准确性和可靠性。考虑您的实验的性质和目标的蛋白质。该试剂盒是否识别全长蛋白质或特定表位？评估套件与您的目标的兼容性可确保结果的准确性和相关性。交叉反应性也可能是针对肽产生的抗体的一个问题，因此确保适当的控制到位很重要。

  为了确保选择具有高靶抗原特异性的ELISA试剂盒，你可以考虑以下几个方面：

  1、查阅文献:了解其他研究者在类似实验中使用的试剂盒，并查看他们对试剂盒特异性的评价。

  2、联系试剂盒供应商:向供应商咨询试剂盒的抗体特异性，并索取相关数据，例如抗体与靶抗原不同亚型的结合能力。

  3、进行预实验:使用少量样品测试不同的试剂盒，比较它们的背景信号和特异性。

  ELISA灵敏度和动态范围

  ELISA试剂盒的灵敏度是一个关键参数，它们决定了试剂盒的检测能力，并影响实验结果的准确性和可靠性。，尤其是在处理低丰度蛋白质时。评估试剂盒的检测下限(LOD)和动态范围，因为这些因素决定了试剂盒在一定浓度范围内准确定量蛋白质的能力。具有宽动态范围的高灵敏度套件通常更适合多功能应用。

  ELISA灵敏度的主要影响因素之一是所检测底物的选择。一般来说，化学发光底物的灵敏度是比色底物的10-20倍。如果需要更高的灵敏度，您甚至可以考虑使用电化学发光检测、免疫PCR甚至单分子检测的平台，尽管所有这些解决方案虽然非常灵敏，但需要购买专门的设备和试剂。

  测定持续时间和工作流程复杂性

  考虑ELISA试剂盒的实际问题，例如总体检测持续时间和工作流程的复杂性。有些实验可能需要快速周转，而另一些实验可能需要更长的潜伏期。评估实验方案的步骤，包括样品制备、孵育时间和检测方法，以确保与实验室的日程安排和资源兼容。

  ELISA样品

  不同的ELISA试剂盒针对特定样品类型进行了优化，从血清和血浆到细胞裂解物和组织匀浆。验证所选套件是否适合您要分析的样品类型。某些试剂盒可能需要另外外的样品制备步骤，忽视这一方面可能会导致结果受损。

  ELISA样品制备有一些一般规则；最大限度地减少冻融循环，在样品缓冲液中添加蛋白酶抑制剂，确保评估潜在的基质效应并确保优化样品稀释。

  ELISA中的交叉反应和干扰

  检查与相关蛋白质发生交叉反应的可能性或样品中常见物质的干扰。评估试剂盒的特异性及其区分密切相关分子的能力对于获得准确可靠的数据至关重要。

  请务必牢记，厂家可能不会针对所有样品测试其ELISA试剂盒，因此始终存在交叉反应和/或干扰的可能性。运行适当的阳性和阴性对照对于确保结果有效至关重要。

  ELISA厂家可靠性

  可靠的ELISA试剂盒经过严格的验证过程，以确保一致的性能。寻找经过特异性、敏感性和重现性验证的试剂盒。质量控制措施，例如批次间的一致性，表明厂家致力于提供可靠的结果。

  ELISA数据分析

  评估ELISA试剂盒厂家提供的数据分析工具和报告功能。用户友好的软件具有强大的数据分析功能，可简化结果解释并提高实验的整体效率。

  如果您正在执行定量ELISA，即使您没有执行，也请务必注意您的标准曲线。确定是否需要仅使用线性回归模型来绘制数据，或者是否应该使用参数逻辑(4PL)模型。

  售后支持

  信誉良好的厂家提供全面的文档，包括详细的协议和故障排除指南。此外，在实验过程中遇到挑战时，可靠的客户支持非常宝贵。优先考虑在客户服务方面享有良好声誉的厂家。

  最后，大家在选购ELISA试剂盒，要考虑合适的试剂盒是非常重要的，它决定你实验的结果。通过上述为大家介绍选择试剂盒考虑的因素，大家可以参考！在选择ELISA试剂盒时候心中有数。上海通蔚生物拥有15年以上的ELISA试剂盒生产经验，搭建了ELISA试剂盒开发和成熟抗原-抗体系统的良好平台。如果需要考虑订购ELISA试剂盒，欢迎前来咨询。