ELISA 实验必备：细说6种关键试剂的作用

  ELISA实验会用到哪些试剂？在ELISA中常用到的试剂包括包被液 、封闭液、洗涤缓冲液、样品稀释液 、酶标抗体、底物和终止液。接下来，上海通蔚就elisa实验所需试剂详细说明。

  在介绍试剂之前，我们先简单了解下elisa基本原理。elisa基本原理是利用抗原抗体的特异性结合反应，将待测样品中的抗原或抗体与酶标记的抗体或抗原结合，再通过洗涤和显色等步骤，对待测样品中的抗原或抗体进行定量或定性分析。详情ELISA检测试剂盒，可以参考《ELISA检测试剂盒：原理、步骤和操作指南》

  包被液。Elisa实验第一步就是包被，即将抗原或抗体固定在酶标板上，以便后续的抗原抗体反应。包被液用于将抗原或抗体吸附到酶标板上，通常是碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液。包被液作用：

  1、提供合适的pH和离子强度环境:包被液通常是碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液，可以提供合适的pH和离子强度环境，促进蛋白质与聚苯乙烯表面的结合。

  2、提高蛋白吸附效率:一些包被液中可能含有额外的成分，例如蛋白质稳定剂或表面活性剂，可以进一步提高蛋白质的吸附效率和稳定性。

  封闭液。在包被之后，立即使用效果较好的封闭液（如细胞培养级BSA、Tween等）封闭非特异性抗体。用于封闭酶标板上未被抗原或抗体占据的位点，减少非特异性结合。

  洗涤缓冲液。用于洗去未结合的物质，降低背景信号，让您的信号更加清晰，通常是 PBS (磷酸盐缓冲液) 或 Tris 缓冲液，可能含有 Tween-20 等去污剂。可以说在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。

  酶标抗体。在elisa实验中，与目标抗原或抗体特异性结合，并带有酶标记，例如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)。

  底物。与酶标抗体上的酶反应，酶会催化底物发生反应，产生可检测的信号，例如颜色变化或发光。通过检测信号的强度，我们可以定量样品中的目标蛋白（抗原或抗体）。

  终止液。用于终止酶-底物反应，例如酸性溶液或 EDTA 溶液。终止液有两方面作用：一是终止液破坏了HRP酶的活性，使酶的催化功能丧失，中止反应，使得读数相对稳定，轻易控制；

  二是终止液使酶失活的同时，使得pH降低，显色底物的特征吸收波长发生变化，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌，联苯醌在波长450nm处有最大消光系数。

  ELISA试剂盒保存方法

  ELISA是一种灵敏的检测方法，用于检测样品中特定抗原或抗体的存在。为了保持ELISA试剂盒的稳定性和准确性，正确的保存方法非常重要。以下是ELISA试剂盒保存方法的一些建议：

  1.避免反复冻融

  ELISA试剂盒中包含的酶标板和试剂应避免反复冻融。反复冻融会破坏酶的活性，导致检测结果不准确。因此，在储存过程中，应将ELISA试剂盒放在冰箱冷冻室中，使用时取出，并在室温下融化。

  2.低温保存

  ELISA试剂盒中的酶标板和试剂应在低温下保存。通常建议将它们保存在2-8℃的冰箱中。低温可以保持酶的活性和稳定性，延长试剂盒的保质期。

  3.干燥保存

  ELISA试剂盒中的酶标板和试剂应避免潮湿。过高的湿度会导致酶标板变形、变质，影响检测结果。因此，在储存过程中，应将ELISA试剂盒放在干燥、通风的地方，避免直接暴露在空气中。

  4.避免阳光直射

  ELISA试剂盒中的酶标板和试剂应避免阳光直射。阳光中的紫外线会破坏酶的活性，导致检测结果不准确。因此，在储存过程中，应将ELISA试剂盒放在避光的地方，如抽屉或柜子里。

  5.按说明书要求储存

  不同厂家生产的ELISA试剂盒可能有不同因的此储，存在要使求用。试剂盒前，应仔细阅读说明书，了解该试剂盒的储存方法和注意事项。严格按照说明书的要求进行储存可以保证试剂盒的稳定性和准确性。

  上述ELISA试剂实现了ELISA检测的准确性和可靠性。了解ELISA检测试剂盒的组成部分及其作用有助于更好地理解和应用该技术在科研领域的重要性。