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α-淀粉酶抑制筛选检测试剂盒
测定意义
测定原理
需自备的仪器和用品
测定意义
淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)随机催化淀粉中α-1,4-糖苷键水解，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。是人体内负责将淀粉分解为糖的关键消化酶，因此开发α-淀粉酶抑制剂在治疗糖尿病相关研究、天然产物开发、药物发现和基础酶学研究领域扮演着至关重要的角色。
测定原理
α-淀粉酶催化底物反应生成有色产物，其在405 nm 处吸光度上升，加入抑制剂后会抑制α-淀粉酶酶活，吸光度上升的速率会降低，根据吸光度差值可计算出抑制率。
需自备的仪器和用品
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂清单
注意
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试剂名称 |
规格 |
数目 |
贮藏 |
备注 |
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试剂一 |
液体70mL |
x1 |
4℃ |
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试剂二 |
粉剂 |
x1 |
-20℃ |
临用前加入3mL试剂一混匀 |
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试剂三 |
液体1mL |
x1 |
-20℃,避光 |
5mmol/L测定抑制率可作为参考 IC50约为250μmol/L |
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试剂四 |
粉剂 |
x1 |
-20℃,避光 |
临用前加5ml水溶解，避免反复冻融 |
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费（比如低表达处理的样本）；
2、熟悉生化试剂盒的操作流程，尤其是初次使用生化试剂盒测定；
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适；
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题，以便于及时作出调整；
5、通过3 - 5组预实验，判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围，指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。
