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肌酸激酶活性检测试剂盒96样
测定意义
肌酸激酶（CK）主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应，是一个与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生等有直接关系的重要激酶。
测定原理
肌酸激酶能够催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶（Hexokinase）催化ATP和葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰，通过测定340 nm处吸光值变化即可表征肌酸激酶的活性。
需自备的仪器和用品
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96UV孔板、研钵、水浴锅和蒸馏水。
测定操作
测定操作
1、酶标仪预热30min以上，调节温度至37℃，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、试剂二37℃预热10min。
3、在96孔UV板中依次加入：
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试剂名称(μL） |
测定管 |
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样本 |
10 |
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试剂一 |
200 |
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混匀，37℃孵育5min |
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试剂二（已预热10min） |
20 |
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混匀，记录37℃，340nm下10s时的吸光值A1和5min10s时的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1 |
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注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费（比如低表达处理的样本）；
2、熟悉生化试剂盒的操作流程，尤其是初次使用生化试剂盒测定；
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适；
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题，以便于及时作出调整；
5、通过3 - 5组预实验，判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围，指导实验样本稀释比例。
