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人类内源性逆转录病毒R家族探针法qRT-LAMP试剂盒
产品及特点
人类内源性逆转录病毒（Human Endogenous Retroviruses，HERV）是人类基因组中的一部分，它们源自于灵长类动物进化历程中遭遇的外源性逆转录病毒。这些古老的病毒序列约占人类基因组的8%。在这些人类内源性逆转录病毒中，人类内源性逆转录病毒R家族（Human Endogenous Retroviruses R family ，HERV-R）尤为典型，它们在人类基因组中留下了约50个不同的拷贝。研究表明，人类内源性逆转录病毒R家族序列在特定人体组织中显示出较高的RNA表达水平，特别是在那些依赖激素的器官和细胞、具有融合功能的组织，以及那些与外界环境直接接触的组织中。这些发现揭示了人类内源性逆转录病毒R家族在人类生物学中的潜在作用，尤其是在生殖、免疫反应和神经系统功能等方面，因此快速灵敏诊断IPNV具有重要意义。为此本公司根据探针法qRT-LMAP技术，开发了简单快捷的人类内源性逆转录病毒R家族qRT-LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
产品及特点
人类内源性逆转录病毒（Human Endogenous Retroviruses，HERV）是人类基因组中的一部分，它们源自于灵长类动物进化历程中遭遇的外源性逆转录病毒。这些古老的病毒序列约占人类基因组的8%。在这些人类内源性逆转录病毒中，人类内源性逆转录病毒R家族（Human Endogenous Retroviruses R family ，HERV-R）尤为典型，它们在人类基因组中留下了约50个不同的拷贝。研究表明，人类内源性逆转录病毒R家族序列在特定人体组织中显示出较高的RNA表达水平，特别是在那些依赖激素的器官和细胞、具有融合功能的组织，以及那些与外界环境直接接触的组织中。这些发现揭示了人类内源性逆转录病毒R家族在人类生物学中的潜在作用，尤其是在生殖、免疫反应和神经系统功能等方面，因此快速灵敏诊断IPNV具有重要意义。为此本公司根据探针法qRT-LMAP技术，开发了简单快捷的人类内源性逆转录病毒R家族qRT-LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒RNA样品。
2. 恒温扩增，反应设置更加简单。
3. 含荧光探针，可以对扩增进行实时荧光检测（需要荧光PCR仪）。
4. 检测灵敏性一般比RT-PCR高10倍以上。
5. 特异性高，引物是根据人类内源性逆转录病毒R家族RNA保守序列设计的，不会跟其他型别埃柯病毒及其他生物的RNA发生交叉反应。
6. 一般30分钟内出结果，比qRT-PCR快。
7. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
8. 上样量大，对20 μL的反应体系，样品加样量高达到14 μL。
9. 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
10. 本产品足够50次20 μL体系的探针法qRT-LAMP扩增。
11. 本产品只可用于科研。
规格及成分
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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RT-LAMP MasterMix（探针法待加酶） |
200μL |
0.5mL本色盖 |
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逆转录酶-扩增酶混合液 |
100μL |
0.5mL红盖管 |
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20×人类内源性逆转录病毒R家族探针法qRT-LAMP引物-探针干粉 |
50次 |
0.5mL白盖管 |
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人类内源性逆转录病毒R家族阳性对照（1E7拷贝/μL） |
250μL |
0.5mL黄盖管 |
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超纯水 |
1mL |
1.5mL蓝盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采购五孔盒包装 |
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注 意：引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入55 μL的超纯水充分混匀和再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀释标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的RNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。
稀释标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的RNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/mL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品RNA的制备
7. 用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
8. 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10 μL本试剂盒提供的阳性对照（1E7拷贝/μL）加一定量的水充当，总体积必须核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样，NC用水替代。
探针法qRT-LAMP反应20μL体系
9. 注意：第一次使用一个新的试剂盒时，必须先将100 μL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到qRT-LAMP MasterMix（探针法，待加酶）中，盖上盖子后轻柔颠倒1分钟混匀，然后再取用。如果只做1次重复，则标记N+9个RT-LAMP管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-LAMP阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。
10. 反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则设置N+4个qRT-LAMP扩增，增加qRT-LAMP阴性对照和qRT-LAMP阳性对照各1个。
11．本产品必须使用荧光PCR仪器进行扩增。设置60次循环，每次循环65℃保温1分钟，采集FAM通道的荧光信号。
结果分析
1. 若只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct值必须没有读数，或者大于或等于40。样品制备阳性对照和qRT-LAMP阳性对照必须有荧光对数增长，有标准的S扩增曲线，Ct值应该小于40。样品制备阴性对照和qRT-LAMP阴性对照Ct值必须没有读数、大于或等于40，如果小于40则为阳性。
2. 如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。
若把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
自备试剂
待测样品
待测样品
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
