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产品及特点
芹菜花叶病毒(Celery Mosaic Virus，CeMV)属于马铃薯病毒科马铃薯Y病毒属，病毒粒体为线状，长度为760～780 nm。芹菜花叶病毒的传染性和存活率比较高，在自然界中主要通过汁液接触及蚜虫传播，还可从寄主伤口侵入进行传播。不同寄主被侵染后表现出不同的症状，苗期受侵染时，菜心生长停滞、扭曲、全株矮小甚至枯死，被侵染芹菜产量和品质会受到明显影响。芹菜花叶病毒会严重减低芹菜产量，甚至使之丧失商品价值，因此快速检测芹菜花叶病毒具有重要的意义。为此，本公司以探针法qRT-PCR技术为基础开发了芹菜花叶病毒的检测试剂盒，它具有下列特点：
芹菜花叶病毒(Celery Mosaic Virus，CeMV)属于马铃薯病毒科马铃薯Y病毒属，病毒粒体为线状，长度为760～780 nm。芹菜花叶病毒的传染性和存活率比较高，在自然界中主要通过汁液接触及蚜虫传播，还可从寄主伤口侵入进行传播。不同寄主被侵染后表现出不同的症状，苗期受侵染时，菜心生长停滞、扭曲、全株矮小甚至枯死，被侵染芹菜产量和品质会受到明显影响。芹菜花叶病毒会严重减低芹菜产量，甚至使之丧失商品价值，因此快速检测芹菜花叶病毒具有重要的意义。为此，本公司以探针法qRT-PCR技术为基础开发了芹菜花叶病毒的检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏度高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据芹菜花叶病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6. 本产品足够50次20 μL体系的探针法qRT-PCR反应。
7. 本产品只能用于科研。
规格及成分
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成分 |
包装 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
500μL(本色盖） |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL(绿色盖） |
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流脑A,B,Y群探针法qPCR引物-探针混合液 |
150μL(棕色管） |
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流脑A,B,Y群探针法qPCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL) |
50μL(黄色盖） |
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使用手册 |
1份 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入165 μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀释PCR阳性对照以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。本阳性对照由流感A、B和Y群专一性的三种DNA片段组成。
稀释PCR阳性对照以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。本阳性对照由流感A、B和Y群专一性的三种DNA片段组成。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照（试剂盒提供），充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5μL 1×10E5拷贝/μL的阳性对照（上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上用。
样品DNA的制备
7. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是样品制备PC（样品制备阳性对照），一个是样品制备NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备PC。另外用水作为样品制备NC。
8. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
Probe qPCR反应20μL体系，在样品制备室进行
9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（用第4号管中的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为描述操作步骤，
数据处理
1. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。一次实验可以得到三种靶分子的标准曲线，FAM通道得到的数据是A群的，HEX通道得到的数据是B的，ROX通道得到的数据是Y群。
2. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于45。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于40。对待测样品，如果其Ct大于或等于45则为阴性，如果小于或等于40则为阳性。如果在40-45之间，则重复一次。若重复结果Ct值小于45，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。一次实验可以得到三种靶分子的Ct，FAM通道得到的数据是A群的，HEX通道得到的数据是B的，ROX通道得到的数据是Y群。
自备试剂
样品DNA
样品DNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
