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人EGFR基因c.2573T＞G(L858R)点突变探针法qPCR检测试剂盒
产品及特点
EGFR的全名叫表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)， 是一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的具有酪氨酸激酶的糖蛋白，在许多实体肿瘤中EGFR高表达或异常表达，因此，以EGFR为治疗靶标的分子靶向治疗成为国内外肿瘤界关注的焦点。由于EGFR基因激活突变使得靶向治疗效果明显，因此用药前对患者进行EGFR基因激活突变检测具有重要的指导意义。人EGFR基因激活突变最常见的为19号外显子缺失突变和21号外显子的2573T>G突变（rs121434568），它们占人EGFR所有激活突变的80-90%，因此研究2573T>G突变具有重要的研究意义，为此本公司开发了专门检测2573T>G突变的探针法qPCR检测试剂盒，它具有下列特点：
EGFR的全名叫表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)， 是一种广泛分布于人体各组织细胞膜上的具有酪氨酸激酶的糖蛋白，在许多实体肿瘤中EGFR高表达或异常表达，因此，以EGFR为治疗靶标的分子靶向治疗成为国内外肿瘤界关注的焦点。由于EGFR基因激活突变使得靶向治疗效果明显，因此用药前对患者进行EGFR基因激活突变检测具有重要的指导意义。人EGFR基因激活突变最常见的为19号外显子缺失突变和21号外显子的2573T>G突变（rs121434568），它们占人EGFR所有激活突变的80-90%，因此研究2573T>G突变具有重要的研究意义，为此本公司开发了专门检测2573T>G突变的探针法qPCR检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到1000拷贝/μL。
3. 分辨率高，能检测出5%的点突变。
4. 一管式检测，野生型探针用FAM标记，突变型探针用HEX标记。
5. 同时提供野生型和突变型两种阳性对照，便于排除假阴性样品。
6. 特异性高，引物和探针是根据人EGFR基因2573T>G突变设计，不会跟其他突变发生交叉反应。
7. 本产品只能定性，不能定量。
8. 本产品足够50次20 μL体系的点突变探针法荧光定量PCR反应。
9. 本产品只能用于科研。
规格及成分
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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2×点突变Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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超纯水 |
1mL |
1.5mL蓝盖管 |
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人EGFR基因rs121434568位点检测引物-探针混合液干粉 |
50次 |
0.5 mL白色管 |
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人EGFR基因rs121434568位点检测引物-探针混合液干粉 |
250 μL |
1.5mL棕色管 |
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人EGFR基因rs121434568位点突变型阳性对照(1×10E4拷贝/μL) |
250 μL |
0.5mL黄盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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注 意：使用前需要在引物探针干粉管中加入160 μL的自备超纯水，震荡混匀后再取用一次没用完剩下的需要放-20℃保存。 |
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使用方法
样品DNA的制备
样品DNA的制备
1. 如果有N个样品，则进行N次纯化，得到的DNA最后溶解在TE中，并需要用NanoDrop进行定量。最后的浓度不能低于0.2ug/μL。
2. 本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。
点突变Probe qPCR反应20μL体系，在样品制备室进行
3. 如果只做1次重复，则标记N+3个PCR管，其中N个用于上步得到的N样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板，NC），3个用于阳性对照（PC）。
4. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后加。
数据处理
1. 实验有效性的判断：首先分析扩增NC是否有FAM或/和HEX信号，如果有则表示实验污染，本次实验无效，无需分析所有实验数据，需要寻找原因。如果无则表示实验没有污染，再分析三个PC。如果野生型PC没有FAM扩增信号（有标准的倒S扩增曲线，下同），或突变型PC没有HEX扩增信号，或杂合型PC没有FAM和HEX扩增信号，则表示实验无效，不需要分析样本的数据，需要分析原因。如果三个PC正常（野生型PC有FAM扩增信号，突变型PC有HEX扩增信号，杂合型PC有FAM和HEX扩增信号），则实验有效，可以分析样本的数据。
2. 如果荧光定量PCR仪有基因分型的自动分析模块，则进入该模块，获得每个样本的HEX值/FAM值的荧光比值，并根据荧光比值描出散点图。荧光比值位于散点图的X轴方向的样本可以判为突变型，荧光比值将位于Y轴方向的样本可以判为野生型，荧光比值位于X轴和Y轴中间的可以判为杂合子。扩增NC的荧光比值将位于原点附近。
3. 如果荧光定量PCR仪没有基因分型的自动分析模块，则需要手动分析。首先根据Ct值判断每个样本在FAM和HEX两个通道的扩增情况。如果FAM通道的Ct低于35，则算FAM信号有扩增。
自备试剂
样品DNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
