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测定意义
肌酸(Creatine)是一种含氮化合物，自然存在于脊椎动物体内，能够辅助为肌肉和神经细胞提供能量。肌酸可由精氨酸（arginine)、甘氨酸（glycine）及甲硫氨酸（methionine）三种氨基酸合成，可由人体自行合成，也可以从食物中摄取。肌酸补充剂是一种运动性能增强剂，也用于治疗肌肉和神经退行性等疾病，因此肌酸的检测在研究和开发中具有广泛的应用。
测定原理
肌酸在肌酸酶的作用下生成肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成过氧化氢，过氧化氢与显色剂反应呈现紫色，该有色物质在546nm有最大吸收峰，进而计算得到肌酐含量。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水。
测定步骤
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，设置温度再37℃，调节波长至546nm。
2、在EP管中加入下列试剂：
注意
1.如果ΔA大于1，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
如果ΔA的值小于0.01，可增加样本加样体积V1(如由10uL增至20uL或更多，则试剂二相应减少，空白管和标准管变化同测定管)，或增加样本取样质量W；则改变后的V1和W需带入公式重新计算。
预实验的意义
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试剂(μL) |
测定管 |
空白管(只做一管) |
标准管(只做一管) |
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样本 |
10 |
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蒸馏水 |
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10 |
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标准品 |
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10 |
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试剂一 |
190 |
190 |
190 |
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混匀，546nm处测定吸光值A137℃孵育15min后于546nm处读取吸光值A2ΔA=A2-A1 |
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预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费（比如低表达处理的样本）；
2、熟悉生化试剂盒的操作流程，尤其是初次使用生化试剂盒测定；
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适；
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题，以便于及时作出调整；
5、通过3 - 5组预实验，判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围，指导实验样本稀释比例。
