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过氧化氢含量检测试剂盒荧光法
测定意义
H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD 等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2 可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。
测定原理
该测定试剂盒使用 Amplex™ Red试剂（10-乙酰基-3,7-二羟基吩噁嗪）检测过氧化氢 (H2O2)。Amplex™ Red试剂与辣根过氧化物酶 (HRP) 配合使用以检测从生物样品（包括细胞）中释放或在酶偶联反应中生成的H2O2。
需自备的仪器和用品
天平、离心机、荧光酶标仪/酶标仪、移液器、涡旋混匀仪、黑色96孔板/酶标板、匀浆器。
试剂组成和配制
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试剂名称 |
规格 |
数目 |
贮藏 |
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提取液 |
液体100mL |
x1 |
4℃ |
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试剂一 |
液体200uL |
x1 |
4℃,避光 |
取10μL试剂一和990 μL提取液混匀即为试剂一A |
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试剂二 |
粉剂 |
x1 |
-20℃,避光 |
临用前加入6mL提取液溶解，分装冻存，避免反复冻融。 |
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试剂三 |
粉剂 |
x1 |
-20℃,避光 |
临用前加入78μL试剂四（预先恢复至室温）溶解，现用现配，不可保存。 |
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试剂四 |
液体 |
x1 |
4℃,避光 |
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注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费（比如低表达处理的样本）；
2、熟悉生化试剂盒的操作流程，尤其是初次使用生化试剂盒测定；
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适；
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题，以便于及时作出调整；
5、通过3 - 5组预实验，判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围，指导实验样本稀释比例。
