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品质保证 · 通蔚试剂

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  • 探针法qPCR试剂盒

    甲型流感(禽流感)病毒H16亚型探针法qRT-PCR试剂盒

    规格：
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW-E10737
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 货期 : 2年
    • 规格 ：50T
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产品及特点

甲型流感即禽流感，甲型流感病毒H16亚型(Influenza Virus A)主要引发结膜炎和轻微的流感样症状，偶尔也曾引发死亡病例，但未见能在人与人之间传播。历史上发生过H16亚型病毒感染哺乳类（包括人）的病毒有H16N9、H16N8和H16N7等抗原组合，对人毒力较小，但容易在禽类中引起大规模感染,因此快速灵敏诊断具有重要意义。本产品就是以探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的专门检测甲型流感病毒H16亚型的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据甲型流感病毒H16亚型RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5各数量级。
6. 本产品足够50次20μL体系的探针法qRT-PCR反应。
7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成分

规格

包装

探针法qRT-PCR缓冲液

500μL

0.5mL蓝盖管

探针法qRT-PCR酶混合液v2

50μL

0.5mL红盖管

荧光PCR专用模板稀释液

1mL

1.5mL绿盖管

甲型流感病毒H16亚型qRT-PCR引物-探针干粉

50次

0.5mL棕色管

甲型流感病毒H16亚型qRT-PCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL)

50μL

0.5mL黄盖管

使用手册

1份

无

本产品采用五孔盒包装

注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。


使用方法

稀释标准曲线样品以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。

1. 标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品RNA的制备
7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 μL上步所得第4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
Probe qRT-PCR反应20 μL体系，在样品制备室进行
9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），1个用于RT-PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

数据处理
1. 把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
2. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须没有读数，或者大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其Ct没有读数、大于或等于40则均为阴性，如果小于40则为阳性。

自备试剂
样品RNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期2年