ELISA试剂盒

PCR试剂盒

生化试剂盒

农残检测试剂盒

细胞库

基础培养基

完全培养基

原代细胞

细胞专用培养基

细胞系

菌株

生化试剂

病理染色液

科研抗体

形态病理检测

宋内氏志贺氏菌探针法qPCR试剂盒

规格：

品牌 : 通蔚生物
目录号 : TW-E10387
应用 : 仅限于科研使用
货期 : 2年
规格：50T

宋内氏志贺氏菌探针法qPCR试剂盒

产品及特点

志贺氏菌（Shigella）又称为痢疾杆菌，属于革兰氏阴性兼性细胞内致病菌，临床上可引起细菌性痢疾。志贺氏菌属共有四个种48个血清型，包括痢疾志贺氏菌（Shigella dysenteriae）、福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）、宋内氏志贺氏菌（Shigella sonnei）和鲍氏志贺氏菌（Shigella boydii）。宋内氏志贺氏菌常引起痢疾的暴发和流行，给全球人类健康带来极大的威胁。因此宋内氏志贺氏菌的快速检测具有重要意义。为此本公司以探针法qPCR技术为基础开发了宋内氏志贺氏菌的检测试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2. 引物和探针经过优化，灵敏度高，检测限可达100拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据宋内氏志贺氏菌基因组DNA高度保守区设计，不会跟其它生物的DNA发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时，线性范围至少5个数量级。

6. 本产品足够50次20 μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成分	规格	包装
2×Probe qPCR MasterMix	500μL	0.5mL本色盖
荧光PCR专用模板稀释液	1mL	1.5mL绿盖管
超纯水	1mL	1.5mL蓝盖管
宋内氏志贺氏菌qPCR引物-探针干粉	50次	0.5mL棕色管
宋内氏志贺氏菌阳性对照(1E7拷贝/μL)	50μL	0.5mL黄盖管
使用手册	1份	1份
本产品采用五孔盒包装
注意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入165uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法

稀释标准曲线样品以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头（下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡混匀1分钟，得到1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡混匀1分钟，得到1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL的阳性对照(上步所得)，充分震荡混匀1分钟，得到1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 依次重复上面的操作得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

样品DNA的制备

7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。

8. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

Probe qPCR反应20 μL体系，在样品制备室进行

9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

数据处理

1. 如果扩增阳性对照或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。

2. 如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。

3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。

4. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果Ct小于40则为阳性。

自备试剂

样品DNA

运输及保存

低温运输，-20℃保存，有效期2年

021-54845833/15800441009