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产品中心

  • 人Kra基因c.34GT(p.G12C)突变探针法qPCR检测试剂盒

    规格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW-E10230
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 货期 : 1年
    • 规格 :50T
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人Kra基因c.34GT(p.G12C)突变探针法qPCR检测试剂盒

产品及特点
KRAS基因的全名叫Kirsten Rat Sarcoma Viral Oncogene Homolog,(Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物),它编码一种小GTP酶,该酶属于RAS超蛋白家族。KRAS基因位于1号染色体上。大约有30%的癌症患者都存在KRAS突变,其中包括90%的胰腺癌,50%的结肠癌和25%的肺癌。在非小细胞肺癌中,KRAS基因突变占20~30%,多存在于肺腺癌中,肺鳞癌中比较罕见。在KRAS突变类型中,c.34G>T(p.G12C)突变最常见,约占所有KRAS突变的44%,最常见的癌种是非小细胞肺癌,因此快速检测此突变具有重要的意义。为此本公司开发了简单快捷的检测该位点的点突变探针法qPCR检测试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
2. 引物和探针经过优化,分析灵敏性高,可以达到1000拷贝/μL。
3. 能检测出5%的点突变。
4. 提供两种阳性对照,便于区分假阴性样品。
5. 特异性高,引物是根据人Kras基因rs121913530位点设计,不会跟其他位点的DNA发生交叉反应。
6. 本产品只能定性,不能定量。
7. 本产品足够50次20μL体系的点突变探针法荧光定量PCR反应。
8. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成分

规格

包装

2×点突变Probe qPCR MasterMix

0.5mL

0.5mL本色管

超纯水

1mL

1.5mL蓝盖管

rs121913530位点检测引物-探针混合液干粉

50次

0.5 mL白色管

rs121913530位点GG阳性对照(1×10E4拷贝/μL)

250 μL

1.5mL棕色管

rs121913530位点TT阳性对照(1×10E4拷贝/μL)

250 μL

0.5mL黄盖管

使用手册

1份

本产品采用五孔盒包装


使用方法
样品DNA的制备
1. 如果有N个样品,则进行N次纯化,得到的DNA最后溶解在TE中,并需要用NanoDrop进行定量。最后的浓度不能低于0.2ug/μL。
2. 本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。
点突变Probe qPCR反应20μL体系,在样品制备室进行
3. 如果只做1次重复,则标记N+3个PCR管,其中N个用于上步得到的N样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板,NC),3个用于阳性对照(分别对应两种纯合子基因型和一种杂合子基因型)。
4. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加


数据处理

1. 一般的荧光定量PCR仪在基因分型的模式下,都可以自动根据两个通道获得的荧光值,计算每个样品的比值(HEX值/FAM值),并描出散点图。突变基因型的比值点将位于散点图的X轴方向,正常基因型的比值将位于Y轴方向,杂合子基因型的比值将位于中间,阴性对照的比值将位于原点附近。如果阴性对照有任何信号,则表示污染,本次实验无效,需要寻找原因。

2. 也可以手动整理下表进行基因型判断。首先设置阈值,FAM的阈值根据GG阳性对照的FAM荧光值设置,HEX的阈值根据TT阳性对照的HEX荧光值设置。如果阴性对照有任何信号,则表示污染,本次实验无效,需要寻找原因。如果实验有效,则分析样品。如果样品Ct值低于35,则算有扩增。高于35,则算无扩增。

自备试剂
样品DNA
运输及保存
低温运输,-20℃保存,有效期1年
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