产品及特点
禽流感病毒（Influenza A Virus）即甲型流感病毒，属单股负链RNA病毒。
该病毒感染禽类且容易在鸟类间流行，过去在民间称为“鸡瘟”，国际兽疫局将其定为甲类传染病，其中H5和H7型为高致病性毒株可造成急性禽流感。又称欧洲鸡瘟，主要发生于鸡和火鸡，常突然爆发，无先兆症状就突然死亡，死亡率50%～100%。新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV）属单股负链RNA病毒。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。弱毒株仅引起鸡群呼吸道感染和产蛋量下降，但可迅速康复。禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒严重影响禽类健康造成养殖业的损失，因此快速检测禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒具有重要的意义。本产品就是以探针法qRT-PCR技术为基础开发的同时检测禽流感病毒H5、H7型及新城疫病毒的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于排除假阴性结果。
4. 特异性高，引物和探针分别根据禽流感病毒RNA H5型、H7型以及新城疫病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为4个数量级。
6. 禽流感病毒H5型、H7型及新城疫病毒分别用FAM、ROX和HEX标记的三个探针检测。
7. 本产品足够50次20μL体系的探针法RT-PCR反应。
8. 本产品只能用于科研。
规格及成分
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成分
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规格
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包装
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探针法qRT-PCR缓冲液
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500μL
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0.5mL蓝盖管
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探针法qRT-PCR酶混合液v2
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50μL
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0.5mL红盖管
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荧光PCR专用模板稀释液
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1mL
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1.5mL绿盖管
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流感病毒H5/H7型及新城疫病毒三重RT-PCR引物-探针干粉
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50次
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0.5mL棕色管
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禽流感病毒H5型阳性对照（1×10E7拷贝/μL
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50μL
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0.5mL棕色管
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禽流感病毒H7型阳性对照（1×10E7拷贝/μL）
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50μL
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0.5mL棕色管
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新城疫病毒阳性对照（1×10E7拷贝/μL）
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50μL
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0.5mL黄盖管
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使用手册
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1份
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无
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本产品采用十孔盒包装
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注 意：在使用前需要短暂离心引物-探针干粉管，然后在离心管中加入220uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
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使用方法
稀释禽流感病毒H5型标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
稀释禽流感病毒H7型检测标准曲线样品
7. 操作同上，只是使用试剂盒提供禽流感病毒H7型阳性对照作为模板。得到6个浓度的样本放冰上待用，分别是B1-B6。
稀释新城疫病毒检测标准曲线样品
8. 操作同上，只是使用试剂盒新城疫病毒阳性对照作为模板。得到6个浓度的样本放冰上待用，分别是C1-C6。
样品RNA的制备
9. 如果有N个样品，设置N+4个提取，多出的3个是禽流感病毒H5型/H7型及新城疫病毒的PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用自备的、确定是阳性的样本作为样品制备阳性对照，可以用自备的、确定是阴性的样本作为样品制备阴性对照，可以用水替代。
10. 用自选方法纯化样品的RNA（含内参），本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容。
数据处理
1. 如果所有标曲扩增或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。
2. 如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。
3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，分别以阳性对照（FAM通道、HEX通道和ROX通道）的Ct值为纵轴，绘制标准曲线，阳性对照的标准曲线为斜线，r2必须大于0.95。再以待测样品的Ct值从阳性对照的标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
4. 对定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照FAM、ROX及HEX通道的Ct必须大于或等于40。禽流感病毒H5型阳性对照FAM通道的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于35。对待测样品，如果其FAM通道的Ct大于或等于40则为禽流感病毒H5型阴性，如果小于或等于35则为禽流感病毒H5型阳性。禽流感病毒H7型阳性对照ROX通道的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于35。对待测样品，如果其ROX通道的Ct大于或等于40则为禽流感病毒H7型阴性，如果小于或等于35则为禽流感病毒H7型阳性。新城疫病毒阳性对照HEX通道的荧光信号必须有对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于35。对待测样品，如果其HEX通道的Ct大于或等于40则为新城疫病毒阴性，如果小于或等于35则为新城疫病毒阳性。
自备试剂
样品RNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
购物车
帮助
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