肠粘附性大肠杆菌属(Enteroadhesive Escherichia coli)为新近从肠致病性大肠杆菌菌群中分出的致腹泻性大肠杆菌,能黏附于小肠上皮细胞,并在其表面大量繁殖而引起微绒毛病变。已知有两个菌种和十余个血清型。聚合性黏附大肠埃希菌黏附于肠粘膜时呈聚合状,可释放肠毒素;广泛黏附大肠埃希菌不产生肠毒素及Vero毒素,腹泻机制不明。是儿童腹泻,尤其是发展中国家儿童腹泻的重要病原,并且还与人类免疫缺陷病毒感染者的慢性腹泻和旅游者腹泻有关,因此快速检测肠粘附性大肠杆菌具有重要的意义。本产品就是以探针法qPCR技术为基础开发的专门检测肠粘附性大肠杆菌的试剂盒,它具有下列特点:
规格及成分
成分
规格
包装
2×Probe qPCR MasterMix
0.5mL
0.5mL本色盖
荧光PCR专用模板稀释液
1mL
1.5mL绿盖管
超纯水
1mL
1.5mL蓝盖管
肠粘附性大肠杆菌qPCR引物-探针干粉
50次
2.0mL棕色管
肠粘附性大肠杆菌qPCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL)
50μL
0.5mL黄盖管
使用手册
1份
无
本产品采用五孔盒包装
注 意:引物-探针干粉在使用前需要短暂离心,然后在离心管中加入162uL的超纯水充分混匀后再使用,未用完的需要-20℃保存。
使用方法
稀释标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
3. 在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在4号管中加入5μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品DNA
低温运输,-20℃保存,有效期1年
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