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髓过氧化物酶活性检测试剂盒48样分光法
测定意义
测定意义
髓过氧化物酶（MPO）是一种由活化的中性粒细胞、单核-巨噬细胞分泌的白细胞酶，主要存在于中性粒细胞和单核-巨噬细胞的嗜苯胺蓝颗粒中，作为系统炎症和氧化应激的标志物，在免疫和炎症过程中发挥重要作用，并参与抗菌、免疫调节和氧化应激等生理过程。
测定原理
髓过氧化物酶可催化H2O2分解，同时将邻联茴香胺氧化生成有色物质，产物在460 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征髓过氧化物酶的活性。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、水浴锅和蒸馏水。
测定步骤和加样表
测定步骤和加样表
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至460nm，蒸馏水调零。
2.工作液的配制：根据使用量按试剂一：试剂四：试剂五=960:40:1的体积比配
制，充分混匀即为检测工作液。
3.在1.5mLEP管中依次加入：
注意
如果ΔA小于0.02，可延长反应时间或增加样本量。如果ΔA大于0.5，可将样本待测液用试剂二稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。
预实验的意义
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试剂名称(μL) |
测定管 |
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样本 |
10 |
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试剂二 |
40 |
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工作液 |
875 |
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混匀，移至1mL比色皿中记录25℃，450nm下的初始吸光值A1和30min后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1 |
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注意
如果ΔA小于0.02，可延长反应时间或增加样本量。如果ΔA大于0.5，可将样本待测液用试剂二稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测，以免造成试剂盒和样本的浪费（比如低表达处理的样本）；
2、熟悉生化试剂盒的操作流程，尤其是初次使用生化试剂盒测定；
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适；
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题，以便于及时作出调整；
5、通过3 - 5组预实验，判断试剂盒对于样本的最佳适应稀释浓度范围，指导实验样本稀释比例。
