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021-54845833/15800441009
菊欧文氏菌玉米致病变种(Erwinia chrysanthemi pv. zeae)是一种革兰氏阴性细菌，能游动，不形成孢子。菊欧文氏菌玉米致病变种属于肠杆菌科欧文氏菌属，主要引起玉米细菌性茎基腐病。该病菌可能在土壤中病残体上越冬，翌年从植株的气孔或伤口侵入，主要为害中部茎秆和叶鞘。玉米茎基部出现水渍状腐烂。玉米茎基部出现“水渍状”圆形或者椭圆形病斑，随着病害加重，病斑呈现黑褐色不规则状。病菌侵染茎秆、心叶等部位，造成生长点坏死，玉米叶片呈现“萎蔫”状，同时因玉米茎秆开裂导致发病植株倒伏。该病菌对玉米的生长危害极其严重，因此快速检测菊欧文氏菌玉米致病变种具有重要的意义。为此，本公司以探针法qPCR技术为基础开发了菊欧文氏菌玉米致病变种的检测试剂盒，它具有下列特点：
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成分 |
规格 |
包装 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL绿盖管 |
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超纯水 |
1mL |
1.5mL蓝盖管 |
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菊欧文氏菌玉米致病变种qPCR引物-探针干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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菊欧文氏菌玉米致病变种qPCR阳性对照(1E7拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL黄盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入165 μL的超纯水充分混匀后得到引物-探针混合液再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀释标准曲线样品以1E1-1E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。样品DNA的制备
7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 μL上步所得第4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
数据处理
样品DNA，超纯水，核酸纯化试剂盒
低温运输，-20℃保存，有效期1年
