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家鸽性别测定探针法qPCR试剂盒
产品及特点
家鸽在我们日常生活中十分常见，它在生态、经济和文化等方面都具有重要的价值。家鸽是单态性鸟，即雌雄同型，无论是幼鸟还是成鸟都很难从外观形态或其他行为上区分雌雄性别，给家鸽行业的从业者带来不便。例如对于肉鸽来说，雄鸽进食量大，但产肉不如雌鸽，故养雌鸽经济效益更高，但没法通过肉眼进行筛选，因此家鸽的性别鉴定技术的研究和建立具有十分重要的意义。本产品就是以家鸽CHD（Chromobox-Helicase-DNA Binding Protein，染色体螺旋蛋白)基因为靶点，设计的专门检测家鸽性别的探针法qPCR试剂盒，它具有下列特点：
家鸽在我们日常生活中十分常见，它在生态、经济和文化等方面都具有重要的价值。家鸽是单态性鸟，即雌雄同型，无论是幼鸟还是成鸟都很难从外观形态或其他行为上区分雌雄性别，给家鸽行业的从业者带来不便。例如对于肉鸽来说，雄鸽进食量大，但产肉不如雌鸽，故养雌鸽经济效益更高，但没法通过肉眼进行筛选，因此家鸽的性别鉴定技术的研究和建立具有十分重要的意义。本产品就是以家鸽CHD（Chromobox-Helicase-DNA Binding Protein，染色体螺旋蛋白)基因为靶点，设计的专门检测家鸽性别的探针法qPCR试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，用于制备标准曲线和用作扩增对照，排除假阴性实验。
4. 含识别内源性内参的引物和探针，便于排除PCR假阴性样本。
5. 特异性高，靶分子的引物和探针是根据家鸽CHD-W和CHD-Z基因设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。彼此也不会发生交叉反应。
6. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。定量检测时线性范围至少为5个数量级。
7. 本产品足够50次20μL体系的探针法PCR反应。
8. 本产品只能用于科研。
规格及成分
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
500μL |
0.5mL本色管 |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL绿盖管 |
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家鸽性别测定PCR引物-探针干粉（含内参引物探针） |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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家鸽CHD-W基因PCR阳性对照(1E4拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL黄盖管 |
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家鸽CHD-Z基因PCR阳性对照(1E4拷贝/μL) |
250μL |
0.5mL白盖管 |
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使用手册 |
1份 |
1份 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入220 mL超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
样品DNA的制备
1. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是制备PC（样品制备阳性对照），一个是制备NC（样品制备阴性对照）。可以用确认是阳性的样本作为阳性对照，用确认是阴性的样本作为阴性对照。
2. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
Probe qPCR反应20 μL体系，在样品制备室进行
3. 如果做只做1次重复实验，则标记N+3个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于CHD-W基因PCR阳性对照（直接用本试剂盒提供的CHD-W阳性对照为模板），1个用于CHD-Z基因PCR阳性对照（直接用本试剂盒提供的CHD-Z阳性对照为模板）。
数据处理
1. 阴性阳性判断：没有Ct读数，或Ct大于40判为阴性结果。有Ct读数，Ct值小于40，荧光信号有对数增长，有典型扩增曲线判为阳性结果。每个反应管均可得到FAM通道、HEX通道和Cy5通道的Ct数值和对应的阴性和阳性结果。
2. 实验有效性判断：如果样本制备阳性对照管或/和PCR阳性对照管的FAM通道信号结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要分析失败原因，可能是操作、仪器和试剂三方面的原因，需要重做扩增或/和核酸制备，也可以直接跟仪器和试剂厂家联系。如果样本制备阴性对照管或/和PCR阴性对照管的FAM通道结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要分析污染原因并将污染清除。如果两个阳性对照和两个阴性对照结果正常，说明本次实验有效，可以进入下一步分析。
3. 样本CHD-W基因检测有效性判断：如果待测样本FAM通道的结果为阳性，则无论该样本的Cy5通道（对应内源内参）的结果是阴性还是阳性，该样本FAM通道的结果有效。如果待测样本管FAM通道的结果为阴性，Cy5通道结果也为阴性，则此样品的阴性结果无效。此样品需要重新提取核酸和进行扩增。
4. 样本CHD-Z基因检测有效性判断：如果待测样本HEX通道的结果为阳性，则无论该样本的Cy5通道（对应内源内参）的结果是阴性还是阳性，该样本HEX通道的结果有效。如果待测样本管HEX通道的结果为阴性，Cy5通道结果也为阴性，则此样品的阴性结果无效。此样品需要重新提取核酸和进行扩增。
5. 性别判断：如果样本同时为有效的FAM阳性和HEX阳性，相当于CHD-W和CHD-Z均为阳性，则为雌性。如果样本为HEX阳性信号阳性，相当于CHD-Z阳性，则为雄性。
自备试剂
样品DNA
样品DNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
