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  • 柯萨奇病毒A6型A10型A16型肠道病毒71型肠道病毒双管五重探针法qRT-PCR试剂盒

    规格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW-E10677
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 货期 : 2年
    • 规格 :50T
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产品及特点

柯萨奇病毒A组(Coxsackievirus A Group,CVA)属于小RNA病毒科肠道病毒属,为正义单链RNA病毒,基因组全长约为7400 nt。柯萨奇病毒A组有24 个血清型,其中,A6型,A10型和A16型的柯萨奇病毒已经成为手足口病重要病原体。肠道病毒(Enterovirus)是一类单股正链RNA病毒,基因组7200 bp到 8500 bp左右,属于小颗粒病毒科。它们主要感染人类,引发手足口病、脊髓灰质炎和心肌炎等,给人类的健康造成了极大危害。肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是基因组约为7400 bp的单股正链RNA病毒,是引起手足口病的重要病原体之一。还能引起无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹等多种与神经系统相关的疾病。上述病毒给人类的健康造成极大的危害。因此对其快速检测具有重要意义。本产品就是以探针法qRT-PCR技术为基础开发的相关试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化,分析灵敏度高,可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照,便于排除假阴性结果。
4. 特异性高,引物和探针分别根据和柯萨奇病毒RNA A6型、A10型和A16型,肠道病毒71型和肠道病毒RNA高度保守区设计,不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测,但不推荐用于定量。
6. 两管五重设计,一管反应用于检测柯萨奇病毒A6 /A10 /A16型,一管用于检测肠道病毒和肠道病毒71型。
7. 本产品足够50次20 μL体系的两管五重探针法RT-PCR反应。
8. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成分

规格

包装

探针法qRT-PCR缓冲液

500μL×2

0.5mL蓝盖管

探针法qRT-PCR酶混合液v2

100μL×2

0.5mL红盖

荧光PCR专用模板稀释液

1mL

1.5mL绿盖

柯萨奇病毒A6型/A10型/A16型三重RT-PCR引物-探针干粉

50次

0.5mL棕色管

柯萨奇病毒A10型阳性对照(1E4拷贝/μL)

50次

0.5mL棕色管

柯萨奇病毒A10型阳性对照(1E4拷贝/μL)

50次

0.5mL棕色管

柯萨奇病毒A16型阳性对照(1E4拷贝/μL)

50μL

0.5 mL黄盖管

使用手册

1份

1份

第一部分,编号15-15575-5-pt1,10孔盒包装

成分

规格

包装

肠道病毒和肠道病毒71型RT-PCR引物-探针干粉

50次

0.5mL棕色管

肠道病毒71型阳性对照(1E4拷贝/μL)

50μL

0.5mL黄盖管

肠道病毒阳性对照(1E4拷贝/μL)

50μL

0.5 mL白盖管

使用手册

1份

1份

第二部分,编号15-15575-5-pt2,5孔盒包装

意:引物-探针干粉在使用前需要短暂离心,然后在离心管中加入165mL的超纯水充分混匀后再使用,未用完的需要-20℃保存。


使用方法

稀释标准曲线样品

1. 如果有N个样品,设置N+6个提取,多出的一个是提取阴性对照,样本为不含有要检测的5种病毒的样本。多出的另外5个是分别含有5种病毒之一的提取阳性对照。
2. 用自选方法纯化样品的RNA(含内参),本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容。
设置两管5重探针法RT-PCR反应20 μL体系
3. 对上步提取得到的N+6个核酸样本,设置(N+6)+6个RT-PCR反应,多出的6个中1个是RT-PCR阴性对照,另外5个分别是5种病毒的扩增阳性对照。

数据处理
1. 5个扩增阳性对照或5个样本制备阳性对照中的任何一个结果为阴性(即在其所对应的荧光通道的Ct大于40或没有Ct值),则整个扩增或制备实验无效,不需要分析数据,需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果任何一个扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性(上表中所用荧光通道任何一个为阳性均算),说明环境污染,则整个扩增或制备实验无效,不需要分析数据,需要跟厂家联系。
2. 如果阴性对照和阳性对照正常,则实验有效,可以进入后续分析。
3. 对第1组样本,如果FAM通道的Ct大于或等于40则为柯萨奇病毒A6阴性,如果小于或等于40则为阳性。如果HEX通道的Ct大于或等于40则为柯萨奇病毒A10阴性,如果小于或等于40则为阳性。如果Cy5通道的Ct大于或等于40则为柯萨奇病毒A16阴性,如果小于或等于40则为阳性。
4. 对第2组样本,如果FAM通道的Ct大于或等于40则为肠道病毒阴性,如果小于或等于40则为阳性。如果Cy5通道的Ct大于或等于40则为肠道病毒71型阴性,如果小于或等于40则为阳性。

自备试剂
样品RNA,超纯水
运输及保存
低温运输,-20℃保存,有效期2年