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盖塔病毒探针法qRT-PCR试剂盒

规格：

品牌 : 通蔚生物
目录号 : TW-E10437
应用 : 仅限于科研使用
货期 : 1年
规格：50T

盖塔病毒探针法qRT-PCR试剂盒

产品及特点

盖塔病毒(Getah virus，GETV)属于RNA病毒披膜病毒科甲病毒属成员，是一种经蚊虫在脊椎动物中传播的虫媒病毒，广泛分布于东南亚和东亚地区。已证实GETV可引起家畜的疾病，如日本和印度曾多次发生该病毒感染马或猪而导致的疾病流行，近期我国湖南省某地猪群中也发生盖塔病毒病的流行。GETV血清学调查表明，人、多种家畜及某些野生动物中也存在该病毒感染，亚洲、欧洲、大洋洲一些国家的人、猪、马、牛、山羊、犬、兔、袋鼠、鸡和野鸟血清中均检测到GETV病毒抗体，因此快速检测盖塔病毒具有重要的意义。本产品就是以探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的专门检测盖塔病毒的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据盖塔病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。

5. 既用于定性检测，又用于定量检测。定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6. 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量qRT-PCR反应。

7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成分	规格	包装
探针法qRT-PCR缓冲液	500μL	0.5mL蓝色盖
探针法qRT-PCR酶混合液v2	50μL	0.5mL红色盖
荧光PCR专用模板稀释液	1mL	1.5mL绿色盖
盖塔病毒qRT-PCR引物-探针混合液	50次	0.5mL棕色盖
盖塔病毒qRT-PCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL)	50μL	0.5mL黄色盖
使用手册	1份	无
本产品采用五孔盒包装

使用方法

稀释标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。

2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。

3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

样品DNA的制备

7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。

8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数样品RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

Probe qRT-PCR反应20μL体系，在样品制备室进行

9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），1个用于RT-PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

数据处理

1. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。

2. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须没有数值，等于或者大于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其Ct小于40则为阳性。如果没有Ct值，或大于或等于40则为阴性。

自备试剂
样品RNA

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年

021-54845833/15800441009