ELISA试剂盒

PCR试剂盒

生化试剂盒

农残检测试剂盒

细胞库

基础培养基

完全培养基

原代细胞

细胞专用培养基

细胞系

菌株

生化试剂

病理染色液

科研抗体

形态病理检测

草鱼呼肠孤病毒2型探针法qRT-PCR试剂盒

规格：

品牌 : 通蔚生物
目录号 : TW-E10484
应用 : 仅限于科研使用
货期 : 1年
规格：50T

草鱼呼肠孤病毒2型探针法qRT-PCR试剂盒

产品及特点

草鱼呼肠孤病毒2型（Grass Carp Reovirus 2,GCRV-2）是一种双链RNA病毒，其对酸碱的耐受能力较强，可以通过水体或寄生虫传播给健康的草鱼这些易感鱼类。草鱼呼肠孤病毒2型是目前已知的毒力的呼肠孤病毒，主要引起1龄和2龄草鱼出血病，死亡率一般为30~50%，甚至可以高达60~90%。草鱼呼肠孤病毒2型不仅能感染草鱼，还能感染青鱼（Mylopharyngodon piceus）、麦穗鱼（Pseudorasbora parva）、稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）、鲢（Hypophthalmichthys molitrix）等。该病毒流行广、在中国、越南、缅甸等亚洲国家都有报道，同时其具有的危害大、死亡率高、发病季节长等特点，严重影响了广大养殖者的积极性和我国淡水养殖业的健康发展。因此快速灵敏诊断草鱼呼肠孤病毒2型具有重要意义。本产品就是以探针法qRT-PCR技术为基础开发的专门检测草鱼呼肠孤病毒2型的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据草鱼呼肠孤病毒2型的保守基因序列设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6. 本产品足够50次20 μL体系的探针法qRT-PCR反应。

7. 本产品只能用于科研。

规格及成分

成分	规格	包装
探针法qRT-PCR缓冲液	0.5mL	0.5mL本色管
探针法qRT-PCR酶混合液v2	50μL	0.5mL红盖管
荧光PCR专用模板稀释液	1mL	1.5mL绿盖管
草鱼呼肠孤病毒2型qRT-PCR引物-探针干粉	50次	0.5mL棕色管
草鱼呼肠孤病毒2型qRT-PCR阳性对照 (1×10E7拷贝/ μL)	50μL	0.5mL黄盖管
使用手册	1份	无
本产品采用五孔盒包装
注意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法
稀释标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例

由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。

2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。

3. 在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/ μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/ μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/mL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/mL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在4号管中加入5μL1×10E5拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/mL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

样品RNA的制备

7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。

8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

Probe qRT-PCR反应20 μL体系，在样品制备室进行

9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），1个用于RT-PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

数据处理

1. 如果样本制备阳性对照或PCR阳性对照(包括标曲样本)结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行PCR扩增或跟厂家联系。如果样本制备阴性对照或PCR阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。

2. 如果阴性对照和阳性对照均正常，则实验有效，可以进入后续分析。

3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。

4. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果Ct小于40则为阳性。

自备试剂
样品RNA，超纯

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期2年

021-54845833/15800441009