样品保存
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
洗涤液/稀释液配置
标准品配置
试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从40ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至2000pg/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的2000pg/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将2000pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 2000pg/mL、 1000pg/mL、 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。
抗体工作液配置
使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL)
2000
1000
500
250
125
62.5
31.25
0
OD值
2.478
1.611
0.914
0.653
0.444
0.292
0.172
0.051
校正OD值
2.427
1.56
0.863
0.602
0.393
0.241
0.121
0
下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果
重复性
灵敏度