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  • 小鼠分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)ELISA试剂盒

    规格:
    价格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW-E4001
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 英文名 :Mouse SFRP1 ELISA KIT
    • 货期 : 现货
    • 灵敏度 :15.63pg/mL
    • 规格 :48T/96T
    • 检测范围 :31.25 ~ 2000pg/mL
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小鼠分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)ELISA试剂盒
简介
分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)是一种属于分泌性糖蛋白家族的蛋白质,其主要功能是作为Wnt信号通路的拮抗剂,SFRP1通过与Wnt配体竞争性结合,抑制Wnt信号传导,从而在细胞生长、分化和恶性转化中发挥重要作用。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物SFRP1,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中SFRP1的浓度。
需要的其他材料
1.  酶标仪,包含450nm测定波长,同时包含600-680nm校正波长更佳;
2.  移液器及枪头;
3.  蒸馏水或去离子水;
4.  100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机;
6.  水平轨道微孔板振荡器,能够保持500±50 rpm的速度;
7. 用于稀释标准品和样品的试管。

样品保存

样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。

洗涤液/稀释液配置

如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)

标准品配置

试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从40ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至2000pg/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的2000pg/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将2000pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 2000pg/mL、 1000pg/mL、  500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。


小鼠(SFRP1)ELISA试剂盒


抗体工作液配置

使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置
使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备注:如待测样本中SFRP1浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据


以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(pg/mL)

2000

1000

500

250

125

62.5

31.25

0

OD值

2.478

1.611

0.914

0.653

0.444

0.292

0.172

0.051

校正OD值

2.427

1.56

0.863

0.602

0.393

0.241

0.121

0


下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果


小鼠(SFRP1)ELISA试剂盒


重复性

板内变异系数小于10%,板间变异系数小于10%。

灵敏度

经样本测试,本试剂盒的检测灵敏度为15.63pg/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组小鼠SFRP1。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL,并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。