标准品配置
试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从20ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至1000pg/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的1000pg/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将1000pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 1000pg/mL、 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL、 15.63pg/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。
抗体工作液配置
示例数据
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(pg/mL)
1000
500
250
125
62.5
31.25
15.63
0
OD值
2.591
1.646
1.012
0.767
0.509
0.237
0.14
0.08
校正OD值
2.511
1.566
0.932
0.687
0.429
0.157
0.06
0
下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果
重复性