使用本产品之前,必须完整阅读本说明书,仅供科研使用,不能于临床诊断或治疗。
检测原理
需要的其他材料
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)
标准品配置
试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从400ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至20ng/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的20ng/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将20ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、
1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。
抗体工作液配置
使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
标准品浓度(ng/mL) |
20 |
10 |
5 |
2.5 |
1.25 |
0.625 |
0.313 |
0 |
OD值 |
2.510 |
1.767 |
1.042 |
0.636 |
0.454 |
0.253 |
0.166 |
0.064 |
校正OD值 |
2.446 |
1.703 |
0.978 |
0.572 |
0.39 |
0.189 |
0.102 |
0 |
重复性
经样本测试,本试剂盒的检测灵敏度为0.16ng/mL。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL,并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。