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  • 大鼠AMPA离子能谷氨酸受体1(GRIA1)试剂盒

    规格:
    价格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW6612
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 保存条件 : 低温保存
    • 货期 : 现货
    • 商品库存:90
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大鼠AMPA离子能谷氨酸受体1(GRIA1)试剂盒

使用本产品之前,必须完整阅读本说明书仅供科研使用,不能于临床诊断或治疗

简介
AMPA离子能谷氨酸受体1(AMPA-selective glutamate receptor 1)是一种离子型谷氨酸受体,其基因编码为GRIA1,蛋白质ID为P42261,AMPARs(AMPA型离子型谷氨酸受体)是四聚体配体门控离子通道,在突触传递和可塑性中发挥关键作,AMPARs由四种亚基(GluR1、GluR2、GluR3、GluR4)组成,这些亚基的不同组合赋予受体不同的功能特性。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术 : 将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物GRIA1,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中GRIA1的浓度。

需要的其他材料

1.  酶标仪,包含450nm测定波长,同时包含600-680nm校正波长更佳;
2.  移液器及枪头;
3.  蒸馏水或去离子水;
4. 100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机;
6.  水平轨道微孔板振荡器,能够保持500±50 rpm的速度;

7.  用于稀释标准品和样品的试管。

样品保存

样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

试剂准备工作

使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。

洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)

标准品配置

试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从400ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至20ng/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的20ng/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将20ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、

1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。




抗体工作液配置

使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。

酶结合物工作液配置

使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。

备 注:如待测样本中GRIA1浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(ng/mL)

20

10

5

2.5

1.25

0.625

0.313

0

OD值

2.510

1.767

1.042

0.636

0.454

0.253

0.166

0.064

校正OD值

2.446

1.703

0.978

0.572

0.39

0.189

0.102

0



本图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果

重复性

板内变异系数小于10%,板间变异系数小于10%。

灵敏度

经样本测试,本试剂盒的检测灵敏度为0.16ng/mL。

特异性
该试剂盒测定可识别重组大鼠GRIA1。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL,并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。