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021-54845833/15800441009
简介
胰高血糖素样肽-1（GLP-1）是一种 30 或 31 个氨基酸长的肽类激素，来源 于胰高血糖素肽的组织特异性翻译后处理。它由肠道内分泌 L 细胞和脑干孤 束核内的某些神经元在食用食物时产生和分泌。最初的产物 GLP-1（1-37） 容易被酰胺化和蛋白裂解，从而产生两个截断的和等价的生物活性形式，即 GLP-1（7-36）酰胺和 GLP-1（7-37）。活跃的 GLP-1 由两个α-螺旋组成， 分别位于 13-20 和 24-35 的氨基酸位置，由一个连接区分开。与葡萄糖依赖 性胰岛素促进肽（GIP）一样，GLP-1 也是一种增加剂；因此，它能够通过 增强胰岛素的分泌，以葡萄糖依赖的方式降低血糖水平。除了促进胰岛素的 作用，GLP-1 还与许多调节和保护作用有关。与 GIP 不同的是，GLP-1 的作 用在 2 型糖尿病患者中得以保留，因此大量的药物研究已被用于开发基于 GLP-1 的治疗。内源性 GLP-1 主要通过二肽基肽酶-4（DPP-4）以及中性内 肽酶 24.11（NEP 24.11）和肾脏清除迅速降解，导致其半衰期约为 2 分钟。 因此，只有 10-15%的 GLP-1 完整地到达循环，导致空腹血浆水平只有 0-15pmol/L。为了克服这个问题，已经开发了 GLP-1 受体激动剂和 DPP-4 抑制剂来增加 GLP-1 的活性。与胰岛素和磺胺类药物等普通治疗药物相比， 基于 GLP-1 的治疗与体重减轻和低血糖风险较低有关，这是 2 型糖尿病患者 的两个重要考虑。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术 : 将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物IGLP1，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中IGLP1的浓度。
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
样品保存
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先从200ng/mL标准品（200μL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至10ng/mL（例：50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液，制备得到1000μL的10ng/mL浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将10ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为: 10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.313ng/mL、0.156ng/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。
抗体工作液配置
使用前10分钟，将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液，根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置
使用前10分钟，将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液，根据所需用量配置。
备 注：如待测样本中IGLP1浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据
标准品浓度(ng/mL)
10
5
2.5
1.25
0.625
0.313
0.156
0
OD值
2.488
1.671
0.934
0.772
0.374
0.264
0.146
0.056
校正OD值
2.432
1.615
0.878
0.716
0.318
0.208
0.09
0.0
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
下图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果
重复性
板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.08ng/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组牛IGLP1。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
使用ELISA试剂盒之前，请您必须完整阅读说明书，本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断和治疗。
