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十足目虹彩病毒1型探针法LAMP试剂盒
产品及特点
十足目虹彩病毒1型（Decapod Iridescent Virus 1,DIV1），又叫虾虹彩病毒，是近几年来威胁罗氏沼虾养殖产业的重要病害之一，可感染南美白对虾、罗氏沼虾、红螯螯虾等虾类，且具有不同的外观症状。其中，在罗氏沼虾上，典型的特征是额剑基部甲壳出现一块白色三角形区域，称为“白点”，部分虾有空肠空胃、肝胰腺萎缩等症状。在水产研究所长期性病原监测的过程中发现，虾虹彩病毒携带率较高，具有感染性强、致死率高的特点，且呈现出逐年增长的趋势。因此对十足目虹彩病毒1型的快速准确鉴定有重要意义。本公司根据独自开发的探针法LMAP技术，开发了简单快捷的十足目虹彩病毒1型探针法LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
十足目虹彩病毒1型（Decapod Iridescent Virus 1,DIV1），又叫虾虹彩病毒，是近几年来威胁罗氏沼虾养殖产业的重要病害之一，可感染南美白对虾、罗氏沼虾、红螯螯虾等虾类，且具有不同的外观症状。其中，在罗氏沼虾上，典型的特征是额剑基部甲壳出现一块白色三角形区域，称为“白点”，部分虾有空肠空胃、肝胰腺萎缩等症状。在水产研究所长期性病原监测的过程中发现，虾虹彩病毒携带率较高，具有感染性强、致死率高的特点，且呈现出逐年增长的趋势。因此对十足目虹彩病毒1型的快速准确鉴定有重要意义。本公司根据独自开发的探针法LMAP技术，开发了简单快捷的十足目虹彩病毒1型探针法LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供DNA样品。
2. 恒温扩增，反应设置更加简单。
3. 含荧光探针，可以对扩增进行实时荧光检测（需要荧光PCR仪）。
4. 检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
5. 特异性高，根据十足目虹彩病毒1型保守序列设计的4条特异引物和1条探针，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
6. 一般30分钟内出结果，比PCR快。
7. 上样量大，对20 μL的反应体系，样品加样量高达到14 μL。
8. 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
10. 提供内参，便于排除假阴性结果。
11. 本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
12. 本产品足够50次20 μL体系的探针法LAMP扩增。
13. 本产品只可用于科研。
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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4×LAMP MasterMix（探针法，待加酶） |
200μL |
0.5mL绿盖管 |
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Bst DNA聚合酶2.0 |
50μL |
0.5mL红盖管 |
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20×十足目虹彩病毒1型探针法LAMP引物-探针混合干粉 |
50μL |
0.5mL棕盖管 |
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十足目虹彩病毒1型LAMP阳性对照(1×10E4拷贝/mL) |
250μL |
0.5mL黄盖管 |
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十足目虹彩病毒1型LAMP内参对照(1×10E4拷贝/mL) |
250μL |
0.5mL紫盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采购五孔盒包装 |
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注 意：引物探针混合干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入55 μL的超纯水充分混匀和再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
样品DNA的制备
样品DNA的制备
1. 用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10 mL本试剂盒提供的样品阳性对照（1×10E4拷贝/mL）和10 mL内参阳性对照（1×10E4拷贝/mL）加一定量的水作为核酸提取阳性对照样品，加水后的总体积必须跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用10 mL本试剂盒提供的10 mL内参阳性对照（1×10E4拷贝/mL）加一定量的水充当，加水后的总体积必须跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。
探针法LAMP反应20 mL体系
3. 反应设置：如果有N+2个DNA纯化样品，则设置N+4个LAMP扩增，增加的两个反应分别是LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照。首次使用本试剂盒时，需要将Bst DNA聚合酶2.0全部加入到4×LAMP MasterMix（探针法，待加酶）中，轻柔颠倒混匀1分钟后再使用。未用完的部分需要放-20℃保存。
4. 如果使用荧光定量PCR仪，则设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集FAM通道和HEX通道的荧光信号。
结果分析
1. 实验有效性的判断：样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的FAM信号（对应样本）和HEX信号（对应内参）必须有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照的HEX信号（对应内参）必须有标准的S扩增曲线，LAMP阴性对照的FAM信号和HEX信号必须呈现一条平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果上述阳性对照和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。
待测样品的结果判断：在实验有效的情况下，才有必要分析代测样品管的荧光信号。如果其FAM
2. 荧光信号曲线为S型（无论HEX信号如何），则说明样品为阳性。如果FAM荧光信号为平线则说明待测样品为阴性。如果HEX荧光信号为S曲线，说明代测样品（FAM曲线）为真阴性。如果HEX荧光信号也是平线，说明此样品可能是假阴性，此样品需要重复测试
自备试剂
样品DNA，超纯水
样品DNA，超纯水
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
