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禽传染性支气管炎病毒探针法qRT-PCR试剂盒
产品及特点
禽传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus，AIBV）为单股正链RNA病毒，其基因组全长约27600 nt。禽传染性支气管炎病毒感染造成禽传染性支气管炎，该病是世界上目前广泛流行的鸡的一种急性、高度接触性传染病。该病的主要特征是呼吸道症状，导致病鸡眼睛流泪，鼻孔和气管有粘液，打喷嚏，啰音和咳嗽等。禽传染性支气管炎病毒的传播给禽养殖业造成严重经济损失，因此快速检测禽传染性支气管炎病毒具有重要意义。本产品是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测禽传染性支气管炎病毒的试剂盒，它具有下列特点：
产品及特点
禽传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus，AIBV）为单股正链RNA病毒，其基因组全长约27600 nt。禽传染性支气管炎病毒感染造成禽传染性支气管炎，该病是世界上目前广泛流行的鸡的一种急性、高度接触性传染病。该病的主要特征是呼吸道症状，导致病鸡眼睛流泪，鼻孔和气管有粘液，打喷嚏，啰音和咳嗽等。禽传染性支气管炎病毒的传播给禽养殖业造成严重经济损失，因此快速检测禽传染性支气管炎病毒具有重要意义。本产品是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测禽传染性支气管炎病毒的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 会跟其他病原菌的RNA发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5
6. 个数量级。
7. 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
8. 本产品只能用于科研。
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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探针法qRT-PCR缓冲液 |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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探针法qRT-PCR酶混合液v2 |
50μL |
1.5mL红盖管 |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL蓝盖管 |
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禽传染性支气管炎病毒探针法引物-探针干粉 |
50次 |
0.5mL红色管 |
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禽传染性支气管炎病毒阳性对照(1×10E7拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL红盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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注 意：引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162uL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀释标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品DNA的制备
7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
Probe qRT-PCR反应20μL体系，在样品制备室进行
9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照（用水做模板），1个用于RT-PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
数据处理
1. 如果扩增阳性对照或制备阳性对照结果为阴性，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要重做扩增或制备或跟厂家联系。如果扩增阴性对照或制备阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个扩增或制备实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系，购买新的引物和探针。
2. 如果阴性对照和阳性对照正常，则实验有效，可以进入后续分析。
3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
4. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于35。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于35，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于35，则为阴性。如果Ct小于35则为阳性。
自备试剂
样品RNA
自备试剂
样品RNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期2年
低温运输，-20℃保存，有效期2年
