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恶性疟原虫/间日疟原虫探针法qPCR试剂盒
产品及特点
疟原虫，是一类单细胞、寄生性的原生动物。有四种疟原虫会使人类感染疟疾，包括恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、间日疟原虫（Plasmodium vivax）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale） 。这些疟原虫有蚊虫和人两个宿主，包括蚊体内的有性繁殖和人体内的无性增殖，携带疟原虫的按蚊通过叮咬人而传播，引起疟疾寒热往来发作，俗称“打摆子”。我国主要以恶性疟原虫和间日疟原虫感染为主，偶尔有传入性的三日疟原虫和卵形疟原虫感染。因此快速检测恶性疟原虫和间日疟原虫在我国具有重要的意义。本产品就是以探针法qPCR技术为基础开发的同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的试剂盒，它具有下列特点：
规格及成分
产品及特点
疟原虫，是一类单细胞、寄生性的原生动物。有四种疟原虫会使人类感染疟疾，包括恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）、间日疟原虫（Plasmodium vivax）、三日疟原虫（Plasmodium malariae）和卵形疟原虫（Plasmodium ovale） 。这些疟原虫有蚊虫和人两个宿主，包括蚊体内的有性繁殖和人体内的无性增殖，携带疟原虫的按蚊通过叮咬人而传播，引起疟疾寒热往来发作，俗称“打摆子”。我国主要以恶性疟原虫和间日疟原虫感染为主，偶尔有传入性的三日疟原虫和卵形疟原虫感染。因此快速检测恶性疟原虫和间日疟原虫在我国具有重要的意义。本产品就是以探针法qPCR技术为基础开发的同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 能在一管中同时检测两种病原，分别发出FAM和HEX荧光信号。
3. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以分别达到100拷贝/μL。
4. 提供两种阳性对照，便于区分假阴性样品。
5. 特异性高，引物是根据恶性疟原虫和间日疟原虫DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
6. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
7. 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
8. 本产品只能用于科研。
规格及成分
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成分 |
规格 |
包装 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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荧光PCR专用模板稀释液 |
1mL |
1.5mL绿盖管 |
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超纯水 |
1mL |
1.5mL蓝盖管 |
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恶性疟原虫/间日疟原虫qPCR引物-探针混合液 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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恶性疟原虫qPCR阳性对照(1×10E7拷贝/μL) |
50μL |
0.5mL黄盖管 |
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使用手册 |
1份 |
无 |
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本产品采用五孔盒包装 |
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使用方法
稀释标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
本产品提供两种阳性对照，故如有必要，可以做两条标准曲线）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
稀释标准曲线样品以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例
本产品提供两种阳性对照，故如有必要，可以做两条标准曲线）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液。
3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品DNA的制备
7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
8. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
Probe qPCR反应20μL体系，在样品制备室进行
9. 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
数据处理
1. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以恶性疟原虫阳性对照浓度的log值为横轴，以FAM信号的Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的FAM信号Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
2. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须FAM信号无Ct或Ct大于或等于40。恶性疟原虫阳性对照必须有FAM荧光对数增长，有典型扩增曲线，FAM信号Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果FAM信号无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果FAM信号Ct小于40则为阳性。
数据处理HEX信号，对应于间日疟原虫
1. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以间日疟原虫阳性对照浓度的log值为横轴，以HEX信号的Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的HEX信号Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
2. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须HEX信号无Ct或Ct大于或等于40。间日疟原虫阳性对照必须有HEX荧光对数增长，有典型扩增曲线，HEX信号Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果FAM信号无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果HEX信号Ct小于40则为阳性。
自备试剂
样品DNA
样品DNA
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年
低温运输，-20℃保存，有效期1年
