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021-54845833/15800441009
简介
基质金属蛋白酶9（MMP-9），又称92 kDa IV型胶原酶、92kDa明胶酶或明胶酶B（GELB），是一种基质蛋白，属于锌金属蛋白酶家族的一类酶，参与细胞外基质的降解。MMP9基因编码一个信号肽、一个前肽、一个插入了三个重复的纤连蛋白II型结构域的催化结构域，然后是一个C端血浆蛋白样结构域。基质金属蛋白酶（MMP）家族的蛋白参与正常生理过程中细胞外基质的分解，如胚胎发育、生殖、血管生成、骨骼发育、伤口愈合、细胞迁移、学习和记忆，以及病理过程，如关节炎、脑内出血和转移。大多数MMPs以非活性原蛋白的形式分泌，当被细胞外蛋白酶裂解后被激活。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术 : 基质金属蛋白酶9（MMP-9），又称92 kDa IV型胶原酶、92kDa明胶酶或明胶酶B（GELB），是一种基质蛋白，属于锌金属蛋白酶家族的一类酶，参与细胞外基质的降解。MMP9基因编码一个信号肽、一个前肽、一个插入了三个重复的纤连蛋白II型结构域的催化结构域，然后是一个C端血浆蛋白样结构域。基质金属蛋白酶（MMP）家族的蛋白参与正常生理过程中细胞外基质的分解，如胚胎发育、生殖、血管生成、骨骼发育、伤口愈合、细胞迁移、学习和记忆，以及病理过程，如关节炎、脑内出血和转移。大多数MMPs以非活性原蛋白的形式分泌，当被细胞外蛋白酶裂解后被激活。
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
样品保存
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先从480ng/mL标准品（200μL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至24ng/mL（例：50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液，制备得到1000μL的24ng/mL浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将24ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为： 24ng/mL、 12ng/mL、 6ng/mL、 3ng/mL、
1.5ng/mL、 0.75ng/mL、 0.375ng/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。
抗体工作液配置
使用前10分钟，将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液，根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置
使用前10分钟，将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液，根据所需用量配置。
备 注：如待测样本中MMP-9浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据
标准品浓度(ng/mL)
24
12
6
3
1.5
0.75
0.375
0
OD值
2.599
1.632
1.014
0.609
0.422
0.229
0.136
0.066
2.533
1.566
0.948
0.543
0.356
0.163
0.07
0
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
下图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果
重复性
板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.19ng/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组羊MMP-9。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
使用ELISA试剂盒之前，请您必须完整阅读说明书，本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断和治疗。
