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  • 兔末端补体复合体C5b-9(C5b-9)ELISA试剂盒

    规格:
    价格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW-E3174
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 英文名 :Rabbit C5b-9 ELISA KIT
    • 货期 : 现货
    • 灵敏度 :0.47ng/mL
    • 规格 :48T/96T
    • 检测范围 :0.938 ~ 60ng/mL
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简介 
末端补体复合物C5b-9(TCC)是一种通常在病原体细胞膜表面形成的蛋白质复合物,是宿主补体系统激活的结果,因此是免疫系统的一种效应物。抗体介导的补体激活导致TCC沉积在受感染的细胞表面,TCC的组装导致孔隙破坏目标细胞的细胞膜,导致细胞裂解和死亡,TCC是由补体成分C5b、C6、C7、C8和几个C9分子组成,也是由四个补体蛋白(C5b、C6、C7和C8)组成的复合物,它们与质膜的外表面结合,第五个蛋白(C9)的许多拷贝相互勾连,在膜上形成一个环,C9形成的环状结构是膜上的一个孔,允许分子自由扩散进入和离开细胞。如果形成足够多的孔隙,细胞就不再能够生存。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物C5b-9,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中C5b-9的浓度。
需要的其他材料
1.  酶标仪,包含450nm测定波长,同时包含600-680nm校正波长更佳;
2.  移液器及枪头;
3.  蒸馏水或去离子水;
4.  100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机;
6.  水平轨道微孔板振荡器,能够保持500±50 rpm的速度;
7.  用于稀释标准品和样品的试管。
样品保存
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置
如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)

标准品配置

试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从1.2μg/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至60ng/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的60ng/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将60ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 60ng/mL、 30ng/mL、 15ng/mL、 7.5ng/mL  3.75ng/mL、 1.875ng/mL、 0.938ng/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。


兔(C5b-9)ELISA试剂盒

抗体工作液配置
使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置
使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中C5b-9浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据

以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(ng/mL)

60

30

15

7.5

3.75

1.875

0.938

0

OD值

2.600

1.767

0.975

0.696

0.396

0.212

0.172

0.071

校正OD值

2.529

1.696

0.904

0.625

0.325

0.141

0.101

0


下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果

兔(C5b-9)ELISA试剂盒
重复性
板内变异系数小于10%,板间变异系数小于10%。
灵敏度
经样本测试,本试剂盒的检测灵敏度为0.47ng/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组兔C5b-9。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL,并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
使用ELISA试剂盒之前,请您必须完整阅读说明书,本产品仅供科研使用,不能于临床诊断或治疗