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  • 兔纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)ELISA试剂盒

    规格:
    价格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW-E3107
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 英文名 :Rabbit PAI1 ELISA KIT
    • 货期 : 现货
    • 灵敏度 :0.39ng/mL
    • 规格 :48T/96T
    • 检测范围 :0.782 ~ 50ng/mL
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简介 
纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)也被称为内皮凝血酶原激活剂抑制剂或血清蛋白E1,是一种由SERPINE1基因编码的蛋白质。PAI-1升高是血栓形成和动脉粥样硬化的一个风险因素。PAI-1是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin),其功能是作为组织凝血酶原激活剂(tPA)和尿激酶(uPA)的主要抑制剂,后者是凝血酶原的激活剂,因此是纤维蛋白溶解(血凝块的生理性分解)。它是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)蛋白(SERPINE1)。另一种PAI,即血浆蛋白原激活剂抑制剂-2(PAI-2)由胎盘分泌,只在怀孕期间大量存在。此外,蛋白酶奈克斯作为TPA和尿激酶的抑制剂。然而,PAI-1是血浆蛋白原激活剂的主要抑制剂。PAI-1基因是SERPINE1,位于7号染色体上(7q21.3-q22)。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物PAI1,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中PAI1的浓度。
需要的其他材料
1.  酶标仪,包含450nm测定波长,同时包含600-680nm校正波长更佳;
2.  移液器及枪头;
3.  蒸馏水或去离子水;
4.  100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机;
6.  水平轨道微孔板振荡器,能够保持500±50 rpm的速度;
7.  用于稀释标准品和样品的试管。
样品保存
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置:如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)

标准品配置

试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从1μg/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至50ng/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的50ng/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将50ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为:  50ng/mL、 25ng/mL、 12.5ng/mL、 6.25ng/mL、  3.125ng/mL、 1.563ng/mL、 0.782ng/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。

兔(PAI1)ELISA试剂盒

抗体工作液配置

使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。

酶结合物工作液配置
使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中PAI1浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据

以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(ng/mL)

50

25

12.5

6.25

3.125

1.563

0.782

0

OD值

2.465

1.684

0.905

0.754

0.492

0.246

0.187

0.071

校正OD值

2.394

1.613

0.834

0.683

0.421

0.175

0.116

0


下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果

兔(PAI1)ELISA试剂盒
重复性
板内变异系数小于10%,板间变异系数小于10%。
灵敏度 
经样本测试,本试剂盒的检测灵敏度为0.39ng/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组兔PAI1。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL,并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
使用ELISA试剂盒之前,请您必须完整阅读说明书,本产品仅供科研使用,不能于临床诊断或治疗