简介
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)
试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从10ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至500pg/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的500pg/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将500pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL、 15.63pg/mL、 7.82pg/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。

使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备 注:如待测样本中IL-1h浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
标准品浓度(pg/mL) |
500 |
250 |
125 |
62.5 |
31.25 |
15.63 |
7.82 |
0 |
OD值 |
2.406 |
1.757 |
1.041 |
0.613 |
0.547 |
0.251 |
0.145 |
0.074 |
校正OD值 |
2.332 |
1.683 |
0.967 |
0.539 |
0.473 |
0.177 |
0.071 |
0 |
下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果
重复性
使用ELISA试剂盒之前,请您必须完整阅读说明书,本产品仅供科研使用,不能于临床诊断或治疗。