试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从400ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至20ng/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的20ng/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将20ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 20ng/mL、 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。

使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
标准品浓度(ng/mL) |
20 |
10 |
5 |
2.5 |
1.25 |
0.625 |
0.313 |
0 |
OD值 |
2.423 |
1.732 |
1.084 |
0.791 |
0.394 |
0.225 |
0.13 |
0.073 |
校正OD值 |
2.350 |
1.659 |
1.011 |
0.718 |
0.321 |
0.152 |
0.057 |
0 |
