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  • 小鼠足盂蛋白(PODXL)ELISA试剂盒

    规格:
    价格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW-E4009
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 英文名 :Mouse PODXL ELISA KIT
    • 货期 : 现货
    • 灵敏度 :0.08ng/mL
    • 规格 :48T/96T
    • 检测范围 :0.157 ~ 10ng/mL
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小鼠足盂蛋白(PODXL)ELISA试剂盒
简介
足盂蛋白(Podocalyxin,PODXL)是一种跨膜糖蛋白,属于CD34家族,最初在肾小球足细胞中被发现,它在多种组织和细胞类型中表达,包括肾小球足细胞、血管内皮细胞、造血干细胞、巨噬细胞、肺部细胞、神经元以及某些类型的癌症细胞,PODXL具有多种生物学功能,包括控制细胞粘附、迁移和极性,同时作为L-选择素的配体,并参与重组细胞骨架的重组。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及标准品中的待测物PODXL,清洗后,再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物,随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育,待孵育结束后清洗,接着加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中PODXL的浓度。
需要的其他材料
1.  酶标仪,包含450nm测定波长,同时包含600-680nm校正波长更佳;
2.  移液器及枪头;
3.  蒸馏水或去离子水;
4.  100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机;
6.  水平轨道微孔板振荡器,能够保持500±50 rpm的速度;
7.  用于稀释标准品和样品的试管。
样品保存
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配置

如果洗涤液/稀释液(20×)有晶体析出,需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释(例如:1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水)

标准品配置
试剂盒中取出标准品,准备7个试管,先从200ng/mL标准品(200μL)按需吸取一定量用1×稀释液稀释至10ng/mL(例:50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液,制备得到1000μL的10ng/mL浓度标准品),随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液,在这6个单独的试管中将10ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度,共配制7个浓度的标准品,依次为: 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL、 0.157ng/mL,从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中,轻轻吹打混匀,以此类推进行标准品的倍比稀释(如图所示),1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。

小鼠(PODXL)ELISA试剂盒

抗体工作液配置
使用前10分钟,将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液,根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置
使用前10分钟,将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟,随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液,根据所需用量配置。
备注:如待测样本中PODXL浓度高于标准品最高值,请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑(4-P)曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据

以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(ng/mL)

10

5

2.5

1.25

0.625

0.313

0.157

0

OD值

2.449

1.633

0.919

0.741

0.401

0.209

0.123

0.075

校正OD值

2.374

1.558

0.844

0.666

0.326

0.134

0.048

0


下图所示标准曲线仅供示例,结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果

小鼠(PODXL)ELISA试剂盒

重复性
板内变异系数小于10%,板间变异系数小于10%。
灵敏度
经样本测试,本试剂盒的检测灵敏度为0.08ng/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组小鼠PODXL。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL,并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。
使用ELISA试剂盒之前,请您必须完整阅读说明书,本产品仅供科研使用,不能于临床诊断或治疗