编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
2×qRT-PCR 缓冲液 |
500 μL(棕色管) |
试剂二 |
10×qRT-PCR 酶混合液 |
100 μL(红盖) |
试剂三 |
ROX 染料 I,50× |
20 μL(棕色管) |
试剂四 |
ROX 染料 II,50× |
20 μL(棕色管) |
试剂五 |
荧光 PCR 专用模板稀释液 |
1mL(黄盖) |
试剂六 |
甲型流感(禽流感)病毒H5N1亚型染料法 qRT-PCR 引物混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂七 |
甲型流感(禽流感)病毒H5N1亚型染料法 qRT-PCR 阳性对照 (1×10E8/μL) |
50 μL(黄盖) |
试剂八 |
沙核酸释放剂(试用装) |
20 次(1mL,绿盖) |
成分
N+2个制备
所得样品
qRT-PCR
阴性对照
qRT-PCR阳性对照(2-7管)
2×qRT-PCR缓冲液
10μL
10μL
各10μL
甲型流感(禽流感)病毒H5N1亚型
染料法qRT-PCR引物混合物
2μL
2μL
各2μL
50×ROX (见注)
0.4μL
0.4μL
各0.4μL
样品制备所得RNA
模板(来于第8步)
5.6μL
--
--
稀释所得6个阳性对照(来于第6步)
--
--
各5.6μL2号样到2号 管,3号样到3号管
超纯水
--
5.6μL
--
10×qRT-PCR酶混合液
2μL
2μL
2μL
过程 |
温度 |
时间 |
RT(逆转录) |
50℃ |
15-30 min |
预变性 |
95℃ |
5 min |
Qrt-PCR反应40个循环 |
95℃ |
15 sec |
58℃ |
1 min,(采集FAM通道的荧光信号) |
|
按仪器预设程序进行溶解曲线分析 |