产品及特点:
乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状 DNA(covalently closed circularDNA,cccDNA)是乙肝病毒前基因组 RNA 复制的原始模板,虽含量较少,每个肝细胞内只有约 5-50 个拷贝,但对乙肝病毒的复制以及感染状态的建立具有十分重要的意义,只有清除了 cccDNA,才能彻底消除乙肝患者病毒携带状态。因此 cccDNA 的检测具有重要的临床意义。
本产品是基于常规 PCR 技术的乙肝病毒 cccDNA 快速检测试剂盒。它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增乙型肝炎病毒cccDNA ,与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次,但只能用于科研。
规格及成分:
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL(红盖) |
试剂二 |
超纯水 |
1 mL(亮黄色) |
试剂三 |
乙型肝炎病毒cccDNA PCR 引物混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂四 |
乙型肝炎病毒cccDNA PCR 阳性对照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黄盖) |
试剂五 |
使用手册 |
1 份 |
低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:
样品DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备:
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品,则需要做N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 乙型肝炎病毒cccDNA PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系):
3. 对N+2个样品,在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照,故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:
成份 |
N+2 个样品管 |
PCR 阴性对照 |
PCR阳性对照 |
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
乙型肝炎病毒cccDNAPCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
N+2个样品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
PCR 阴性对照(水) |
-- |
18μL |
-- |
PCR 阳性对照(乙型肝炎病毒cccDNAPCR阳性对照1000倍稀释液) |
-- |
-- |
18μL |
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反应35个循环 |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
|
72℃ |
40 sec |
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
四、特别提示:
本公司的所有产品,仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!