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  • 大鼠骨髓树突状细胞(成熟DC细胞)

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    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW33849
    • 应用 : 仅供科研使用
    • 保存条件 : 低温保存
    • 货期 : 现货
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产品简介
产品名称 : 大鼠骨髓树突状细胞(成熟DC细胞)
产品品牌 : 通蔚生物
组织来源 : 骨髓
产品规格 : 5×105cells/T 25细胞培养瓶

细胞简介
大鼠骨髓树突状细胞分离自骨髓;骨髓是机体的造血组织,位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种:红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用,白细胞能杀灭与抑制各种病原体,包括细菌、病毒等;某些淋巴细胞能制造抗体。因此,骨髓不但是造血器官,它还是重要的免疫器官。

骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中,是一种海绵状的组织,能产生血细胞的骨髓略呈红色,称为红骨髓。出生时,红骨髓充满全身骨髓腔,随着年龄增大,脂肪细胞增多,相当部分红骨髓被黄骨髓取代,最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。

骨髓D C 细胞是由骨髓单核细胞诱导而成的;树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞,典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长,在G M -C SF、IL4的作用下形成葡萄串样集落,细胞大而形态不规则,表面皱褶多,亦可见少量短刺状突,胞内细胞器丰富并可见吞噬泡,具有较强的迁移能力,伴随有部分未完全诱导成的单核细胞,贴壁形态多样。而成熟的树突状细胞由未成熟D C 进一步经T N Fα、LPS等诱导而成,多数呈悬浮生长,细胞呈圆形,细胞体积进一步增大,表面大量粗细不等的树枝样突起(高倍镜或者电镜下可观察到 ),伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞。

未成熟D C 细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟。D C 细胞尚无特异性细胞表面分子标志,主要通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物(M H C )以及C D 80、C D 86等共刺激分子,进而激 活T淋巴细胞,诱导免疫应答,处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节;未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力,但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答,不能激活T细胞的第二信号,可导致T细胞无能,从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受。未成熟树突状细胞表面C D 80、C D 86、M H C -Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低,一般在30% 以下。

方法简介
通蔚生物实验室分离的大鼠骨髓成熟D C 细胞采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来,细胞总量约为5×105cells/瓶 。

质量检测
通蔚生物实验室分离的大鼠骨髓树突状细胞(成熟D C 细胞)经C D 86免疫荧光鉴定、细胞形态等综合鉴定,纯度可达80% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
培  养 基 : 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptom ycin等
换液频率 : 每2-3天换液一次
生长特性 : 半贴半悬浮
细胞形态 : 圆形,树突状
传代特性 : 属于高度分化细胞;属于不增殖细胞群
传代比例 : 不传代
消  化 液 : 0.25% 胰蛋白酶
培养条件 : 气相:空气,95% ;C O2,5%
大鼠骨髓树突状细胞(成熟D C 细胞)体外培养周期有限;建议使用通蔚生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片

使用方法
大鼠骨髓树突状细胞(成熟D C 细胞)是一种半贴半悬浮细胞,细胞形态呈圆形,树突 状,在通蔚生物技术部标准操作流程下,细胞属于高度分化细胞;属于不增殖细胞群;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1.取出T 25细胞培养瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2.半贴壁半悬浮细胞处理
1) 收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用吸管吸取PBS,吹洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;经1200-1500rpm 离心3min,弃上清,收集细胞沉淀①。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化。
3) 用吸管轻轻吹打混匀,收集细胞悬液至离心管中;经1200-1500rpm 离心3min,弃上清,收集细胞沉淀②;
4) 吸取5ml新鲜完全培养基,重悬细胞沉淀①、细胞沉淀②,把①、②混匀。
5) 用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞,按实验需求接种于实验器皿内,然后补充适量新鲜的完全培养基,置于37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6) 待细胞状态稳定后,用于实验;可以每2-3天换液一次新鲜的完全培养基。
3.细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1m g/m l),明胶(0.1% ),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和通蔚生物技术部沟通。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。